DNA氧化損傷標記物8-羥基脫氧鳥苷的毛細管電泳安培檢測方法研究.pdf

1、毛細管電泳是上世紀80年代建立并迅速發(fā)展起來的一種新型分離分析技術，具有分離效率高、分析速度快、重現(xiàn)性好及樣品用量少等特點，己廣泛應用于化學、生命科學、藥物和環(huán)境分析等領域。
　　 研究表明，活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)如O2-1、O-、HO2·、·OH、H2O2、RO·、ROO·等可導致DNA氧化損傷，這與衰老、腫瘤的發(fā)生、惡變以及糖尿病和心血管疾病等密切相關。在二十多種DNA氧化損傷

2、產物中，8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine，8-OHdG)被公認為是最重要的標志物之一。它與DNA復制與修復過程中，導致鳥嘌呤與胞嘧啶及腺嘌呤與胸腺嘧啶發(fā)生錯位(G:C→A:T)，堿基脫落及DNA鏈斷裂，誘發(fā)DNA點突變有關。8-OHdG將是一種很好的評價致突變和癌變危險的標記物。由于尿中的8-OHdG不能被進一步代謝，因此尿中8-OHdG對評價個體癌變危險或診斷與氧自由基相關疾病方面是一種很有用的

3、標記物，在臨床上具有很高的應用價值和推廣意義。
　　 要將8-OHdG作為腫瘤標記物用于臨床常規(guī)診斷，首先要建立一種分析速度快、分離效率高、靈敏度高、選擇性好、價廉、易商品化、可用于常規(guī)分離檢測8-OHdG的方法。本論文的主要工作就是發(fā)展了一種基于分子印跡萃取、毛細管電泳-安培檢測(capillary electrophoresis-amperometric detection，CE-AD)聯(lián)用方法。利用一步分子印記固相微萃取預

4、處理尿樣，結合毛細管在柱富集技術--動態(tài)pH調節(jié)進樣fdynamic pHjunction)，進一步提高了方法的靈敏度，使其檢測限達到2.6 nmol/L(S/N=3)；8-OHdG濃度在10 nmol/L～1.5μmol/L濃度范圍內與其峰面積呈現(xiàn)良好的線性關系(R=0.9999)；遷移時間和峰面積的相對標準偏差分別為1.1％和4.0％，尿樣的加標回收率為85.1％。論文中詳細討論了分離電壓、檢測電位、緩沖液濃度及pH值等因素對分析的