毛細(xì)管電泳檢測(cè)多種靶DNA及小分子化合物.pdf

1、本工作將毛細(xì)管電泳—電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)引入靶DNA分析中，將辣根過氧化物酶(HRP)催化過氧化氫(H2O2)氧化鄰氨基酚的酶促反應(yīng)與其氧化產(chǎn)物的電極還原相偶合，利用毛細(xì)管電泳電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)間接檢測(cè)鄰氨基酚—H2O2-辣根過氧化物酶(HRP)體系中的HRP含量。在此基礎(chǔ)上引入生物素．親合素系統(tǒng)，通過毛細(xì)管電泳安培法進(jìn)行分離檢測(cè)21個(gè)、39個(gè)、80個(gè)堿基的靶DNA。 第一章為緒論，介紹了毛細(xì)管電泳技術(shù)的發(fā)展和研究現(xiàn)狀以及本課題的意義；第

2、二章介紹了毛細(xì)管電泳電化學(xué)間接檢測(cè)HRP的情況；第三章用毛細(xì)管電泳電化學(xué)檢測(cè)21個(gè)、39個(gè)、80個(gè)堿基的靶DNA；第四章用毛細(xì)管電泳電化學(xué)檢測(cè)小分子化合物腺苷；第五章用毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)腺苷。 在最佳反應(yīng)條件下，測(cè)定游離HRP檢測(cè)限為1.09×10-12mol·L-1(S/N=3)，線性范圍為2-3×10-12～3.5×10-10mol·L-1。 利用此方法成功應(yīng)用于檢測(cè)21個(gè)堿基的靶DNA，測(cè)定線性范圍為4.0×

3、10-11-2.0×10-9mol·L-1，檢測(cè)限為1.2×10-11mol·L-1(S/N=3)。對(duì)1.0×10-10mol·L-1的21個(gè)堿基ssDNA進(jìn)行7次平行測(cè)定，相對(duì)偏差為7.2％。在實(shí)驗(yàn)條件最優(yōu)化的情況下，可以達(dá)到通過毛細(xì)管電泳安培法對(duì)21個(gè)堿基的單鏈DNA進(jìn)行分離檢測(cè)。 利用此方法成功應(yīng)用于檢測(cè)39個(gè)堿基的靶DNA，測(cè)定線性范圍為5.0×10-11-1.2×10-9mol·L-1，檢測(cè)限為2.4×10-11mol

4、·L-1(S/N=3)。對(duì)1.0×10-10mol·L-1的39個(gè)堿基ssDNA進(jìn)行7次平行測(cè)定，相對(duì)偏差為6.4％。在實(shí)驗(yàn)條件最優(yōu)化的情況下，可以達(dá)到通過毛細(xì)管電泳安培法對(duì)39個(gè)堿基的單鏈DNA進(jìn)行分離檢測(cè)。 利用此方法成功應(yīng)用于榆測(cè)80個(gè)堿基的靶DNA，測(cè)定線性范圍為5.0×10-11-1.0×10-9mol·L-1，檢測(cè)限為3.0×10-11mol·L-1(S/N=3)。對(duì)1.0×10-10mol·L-1的80個(gè)堿基ssD

5、NA進(jìn)行7次平行測(cè)定，相對(duì)偏差為6.9％。在實(shí)驗(yàn)條件最優(yōu)化的情況下，可以達(dá)到通過毛細(xì)管電泳安培法對(duì)80個(gè)堿基的單鏈DNA進(jìn)行分離檢測(cè)。 利用此方法應(yīng)用于同時(shí)檢測(cè)21個(gè)、39個(gè)、80個(gè)堿基的單鏈DNA，成功實(shí)現(xiàn)了同時(shí)進(jìn)行多個(gè)單鏈DNA的分離檢測(cè)。 利用毛細(xì)管電泳電化學(xué)方法成功應(yīng)用于檢測(cè)小分子化合物腺苷，通過實(shí)驗(yàn)，本文得出運(yùn)用2.5×10-2mol·L-1 pH8.6的Tris緩沖液，10kV作為分離電壓，12kV和5s作為