脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵基因LXRα的生物信息學(xué)分析及表達(dá)規(guī)律.pdf

1、脂肪細(xì)胞分化實(shí)質(zhì)是一系列基因時(shí)序表達(dá)的過程，這些基因主要有PPARr、LPL與HSL等。肝x受體α(LiverXrecePtors，LXRα)是脂類代謝過程中一種重要的核受體，研究發(fā)現(xiàn)LXRα在脂肪組織中高表達(dá)，并且LXRα激活后可增加一系列脂肪細(xì)胞標(biāo)志基因如PPARr、LPL、瘦素等的表達(dá)。由此推斷LXRα可能參與脂肪細(xì)胞的分化。細(xì)胞因子是影響脂肪細(xì)胞分化的重要因素，多項(xiàng)研究表明白細(xì)胞介素-6(IL-6)能夠刺激脂肪分解和脂肪酸氧化，

2、然而目前對(duì)于IL-6調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的分子機(jī)制尚不清楚。
　　 本試驗(yàn)首先對(duì)GenBank已發(fā)表的豬LXR基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，在此理論基礎(chǔ)上，以豬為研究對(duì)象，利用半定量RT-PCR技術(shù)研究LXRα在豬各組織中的表達(dá)規(guī)律；利用不同濃度IL-6處理SD大白鼠，分別提取其脂肪組織的RNA和蛋白，通過RT-PCR和Western blotting技術(shù)檢測脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因PPARr、LXRα、LPL與HSL的表達(dá)變化情況；最后分析

3、IL-6調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的可能機(jī)制，為進(jìn)一步應(yīng)用IL-6調(diào)控動(dòng)物體脂沉積，控制人類肥胖及其相關(guān)疾病的研究提供新的靶點(diǎn)和理論依據(jù)。
　　 研究結(jié)果如下：
　　 1、用GenBank已發(fā)表豬的LXRα基因的進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析，得出豬LXRα基因編碼454個(gè)氨基酸蛋白，推測分子量約502910.00 Da。并且LXRα的蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)為混合型，其蛋白包括2個(gè)低組分復(fù)雜性區(qū)域、1個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)ZnF-C4和1個(gè)核受體超家族配體結(jié)合區(qū)

4、(LBD)。系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)豬的LXRα所在的哺乳動(dòng)物類群非常保守。
　　 2、以豬為研究對(duì)象，摸索出擴(kuò)增豬LXRα基因的最佳條件。在退火溫度為48.9℃與鎂離子濃度為2mmol/L的條件下，豬LXRα基因的擴(kuò)增效率最高。
　　 3、以豬為研究對(duì)象，運(yùn)用RT-PCR技術(shù)研究LXRα基因在豬8個(gè)不同組織(內(nèi)臟脂肪、心臟、脾臟、肝臟、肺臟、皮下脂肪、肌肉、腎臟)中的表達(dá)情況。結(jié)果表明：LXRα的表達(dá)具有組織特異性。LXRα在

5、豬的肝臟、皮下脂肪、內(nèi)臟脂肪組織中高表達(dá)，在腎臟中等表達(dá)，而在脾臟、肺臟、肌肉、心臟中表達(dá)很少，幾乎沒有。并且LXRα肝臟中的表達(dá)與其他組織相比差異顯著(P<0.5)。說明LXRα基因脂質(zhì)代謝中發(fā)揮著重要的作用。
　　 4、以SD大白鼠為研究對(duì)象，用不同濃度(0、0.1ug/ml、0.4ug/ml)的IL-6處理48h后，與對(duì)照組相比，PPARr、LXRα和LPL基因的轉(zhuǎn)錄水平顯著下調(diào)，同時(shí)PPARr的蛋白水平也明顯下調(diào)。然而對(duì)