脂肪細胞分化關鍵基因LXRα的生物信息學分析及表達規(guī)律.pdf

1、脂肪細胞分化實質(zhì)是一系列基因時序表達的過程，這些基因主要有PPARr、LPL與HSL等。肝x受體α(LiverXrecePtors，LXRα)是脂類代謝過程中一種重要的核受體，研究發(fā)現(xiàn)LXRα在脂肪組織中高表達，并且LXRα激活后可增加一系列脂肪細胞標志基因如PPARr、LPL、瘦素等的表達。由此推斷LXRα可能參與脂肪細胞的分化。細胞因子是影響脂肪細胞分化的重要因素，多項研究表明白細胞介素-6(IL-6)能夠刺激脂肪分解和脂肪酸氧化，

2、然而目前對于IL-6調(diào)控脂肪細胞分化的分子機制尚不清楚。
　　 本試驗首先對GenBank已發(fā)表的豬LXR基因進行生物信息學分析，在此理論基礎上，以豬為研究對象，利用半定量RT-PCR技術研究LXRα在豬各組織中的表達規(guī)律；利用不同濃度IL-6處理SD大白鼠，分別提取其脂肪組織的RNA和蛋白，通過RT-PCR和Western blotting技術檢測脂肪細胞分化相關基因PPARr、LXRα、LPL與HSL的表達變化情況；最后分析

3、IL-6調(diào)控脂肪細胞分化的可能機制，為進一步應用IL-6調(diào)控動物體脂沉積，控制人類肥胖及其相關疾病的研究提供新的靶點和理論依據(jù)。
　　 研究結(jié)果如下：
　　 1、用GenBank已發(fā)表豬的LXRα基因的進行蛋白質(zhì)結(jié)構分析，得出豬LXRα基因編碼454個氨基酸蛋白，推測分子量約502910.00 Da。并且LXRα的蛋白質(zhì)二級結(jié)構為混合型，其蛋白包括2個低組分復雜性區(qū)域、1個鋅指結(jié)構ZnF-C4和1個核受體超家族配體結(jié)合區(qū)

4、(LBD)。系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)豬的LXRα所在的哺乳動物類群非常保守。
　　 2、以豬為研究對象，摸索出擴增豬LXRα基因的最佳條件。在退火溫度為48.9℃與鎂離子濃度為2mmol/L的條件下，豬LXRα基因的擴增效率最高。
　　 3、以豬為研究對象，運用RT-PCR技術研究LXRα基因在豬8個不同組織(內(nèi)臟脂肪、心臟、脾臟、肝臟、肺臟、皮下脂肪、肌肉、腎臟)中的表達情況。結(jié)果表明：LXRα的表達具有組織特異性。LXRα在

5、豬的肝臟、皮下脂肪、內(nèi)臟脂肪組織中高表達，在腎臟中等表達，而在脾臟、肺臟、肌肉、心臟中表達很少，幾乎沒有。并且LXRα肝臟中的表達與其他組織相比差異顯著(P<0.5)。說明LXRα基因脂質(zhì)代謝中發(fā)揮著重要的作用。
　　 4、以SD大白鼠為研究對象，用不同濃度(0、0.1ug/ml、0.4ug/ml)的IL-6處理48h后，與對照組相比，PPARr、LXRα和LPL基因的轉(zhuǎn)錄水平顯著下調(diào)，同時PPARr的蛋白水平也明顯下調(diào)。然而對