大腸桿菌中CRISPR-Cas系統(tǒng)捕獲間區(qū)序列作用機(jī)理的相關(guān)研究.pdf

1、CRISPR-Cas系統(tǒng)是一類獨(dú)特的獲得性免疫機(jī)制，能使宿主抵御病毒、質(zhì)粒等外來DNA的入侵，廣泛存在于大多數(shù)的細(xì)菌和幾乎所有的古細(xì)菌中。其作用機(jī)理分為三個(gè)階段:首先是間區(qū)捕獲階段，宿主中保守的Cas1/2蛋白復(fù)合體特異性識(shí)別并捕獲外源基因（病毒、質(zhì)粒等）中含有原間區(qū)序列鄰近基序的原間區(qū)序列到CRISPR序列中緊靠引導(dǎo)序列區(qū)的第一個(gè)重復(fù)序列的下游;其次是pre-crRNA成熟階段，CRISPR從引導(dǎo)區(qū)轉(zhuǎn)錄成一段pre-crRNA序列，并

2、被相關(guān)Cas蛋白復(fù)合體切割為成熟的crRNA，crRNA包含一段保守的重復(fù)序列和一個(gè)間區(qū)序列;最后，crRNA與Cas蛋白結(jié)合成為效應(yīng)復(fù)合體通過互補(bǔ)配對(duì)識(shí)別入侵的核酸序列，誘導(dǎo)序列特異性的切割，從而阻止外源遺傳物質(zhì)的增殖擴(kuò)散。近幾年來，CRISPR-Cas系統(tǒng)的作用機(jī)理和應(yīng)用方面得到突破性的進(jìn)展。
　　盡管如此，間區(qū)序列的捕獲階段仍存在很多疑問。為了找到答案，本文設(shè)計(jì)了如下方案，首先在大腸桿菌BL21AI菌株構(gòu)建了一個(gè)高效的間區(qū)序