2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩44頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:研究成簇規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列叢集關(guān)聯(lián)蛋白系統(tǒng)(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated proteins,CRISPR/Cas系統(tǒng)對人宮頸癌細(xì)胞系SiHa和Caski細(xì)胞凋亡的影響。
  方法:設(shè)計(jì)3個(gè)針對HPV16-E6基因的sgRNA,合成Cas9質(zhì)粒,分別轉(zhuǎn)染SiHa(HPV16陽性)和Caski(HPV1

2、6和HPV18雙陽性)細(xì)胞,48小時(shí)后提取細(xì)胞DNA,進(jìn)行PCR,T7E1法檢測3種sgRNA是否能夠針對HPV16-E6基因的特定位點(diǎn)產(chǎn)生雙鏈DNA斷裂(double strand break,DSB)。同樣的轉(zhuǎn)染方法,再將sgRNA和Cas9質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SiHa、Caski和HEK293(HPV陰性)細(xì)胞,48小時(shí)后,流式細(xì)胞儀檢測其對這三種細(xì)胞系凋亡的影響。CCK8法檢測其對這三種細(xì)胞的細(xì)胞增殖狀態(tài)的影響;Western Blot檢測

3、SiHa和Caski細(xì)胞系在處理后48小時(shí)E6蛋白及P53蛋白水平的變化。
  結(jié)果:T7E1酶切結(jié)果顯示,gRNA-1/Cas9不能作用于SiHa和Caski細(xì)胞產(chǎn)生DSB,gRNA-2/Cas9和gRNA-3/Cas9均可以導(dǎo)致SiHa和Caski細(xì)胞產(chǎn)生DSB;流式細(xì)胞儀檢測的凋亡結(jié)果顯示,gRNA-1/Cas9與空白對照的細(xì)胞凋亡情況一致,gRNA-2/Cas9和gRNA-3/Cas9可以導(dǎo)致SiHa和Caski細(xì)胞系凋亡

4、明顯增加,而gRNA-2/Cas9和gRNA-3/Cas9對HEK293細(xì)胞系的細(xì)胞凋亡無明顯作用;CCK8法顯示的細(xì)胞增殖抑制的趨勢與細(xì)胞凋亡相同,即gRNA-2/Cas9和gRNA-3/Cas9轉(zhuǎn)染后的SiHa和Caski細(xì)胞的細(xì)胞增殖被抑制,gRNA-1/Cas9與空白對照組的細(xì)胞增殖狀態(tài)都無明顯變化;western Blot顯示在轉(zhuǎn)染了gRNA-2/Cas9和gRNA-3/Cas9實(shí)驗(yàn)組的SiHa和Caski細(xì)胞中,E6蛋白表達(dá)

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論