南極磷蝦(Euphausia superba)抑菌活性肽的初步純化及其作用機理研究.pdf

1、南極磷蝦(Euphausiasuperba)是南極生態(tài)系統(tǒng)的關鍵物種,不但資源巨大,而且營養(yǎng)價值豐富具有高蛋白、低脂肪等特點,因而對該資源其高值化利用具有重要意義。
　　 本文以南極磷蝦為研究對象,通過雙酶酶解制備南極磷蝦抑菌活性肽混合物,并對酶解工藝條件進行優(yōu)化;采用Labscale小型切向流超濾系統(tǒng)、MSC300超濾杯和CM-52CarboxymethylCellulose陽離子交換層析對南極磷蝦抑菌活性肽混合物進行初步純化

2、,并探討了其抑菌機理。主要研究結(jié)論如下:
　　 1、南極磷蝦蛋白酶解物對金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)具有明顯的生長抑制作用,最佳酶解工藝為中性蛋白酶和胰蛋白酶雙酶水解,最適pH7.5,溫度52.5℃,水解時間3h,雙酶加酶量之比為2:5(W:W),雙酶添加量為3000U/g底物。
　　 2、南極磷蝦抑菌活性肽混合物經(jīng)超濾、弱陽離子交換層析純化后最終得到一個分子量范圍在254～709D的混合肽

3、(命名為CMCC-1),其最低抑菌濃度(MIC)為5mg/mL。
　　 3、抑菌機理研究結(jié)果表明:①CMCC-1在對數(shù)生長期能抑制會黃色葡萄球菌的菌體分裂;②培養(yǎng)液中蛋白和還原糖含量提高、電導率增加,且能檢測到堿性磷酸酶和β-半乳糖苷酶的活性,說明菌體細胞壁和細胞膜可能被破壞,致使菌體通透性增強,大量胞內(nèi)物質(zhì)外泄;③經(jīng)過掃描電鏡對金黃色葡萄球菌菌體形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn),隨著CMCC-1處理時間的延長,加樣組金黃色葡萄球菌菌體細胞形狀

4、變得不規(guī)則,菌體細胞表面粗糙,體積變小,大量的菌體細胞粘連在一起,大量胞內(nèi)物質(zhì)外溢,細胞之間的界限變得模糊不清,幾乎融合為一個整體;④透射電鏡下觀察到,經(jīng)CMCC-1處理后,金黃色葡萄球菌菌體表面變粗糙,細菌的繁殖能力受到抑制,菌體細胞壁變薄、細胞質(zhì)固縮,內(nèi)部空腔變大,菌體內(nèi)含物大量外泄,不規(guī)則地分布在破碎菌體周圍,菌體細胞最終裂解、死亡;⑤經(jīng)SDS-PAGE分析,CMCC-1可導致菌體全蛋白譜帶中部分譜帶的缺失,剩余蛋白譜帶也隨著CM