三種抗菌肽的異源表達、純化和抑菌活性研究.pdf

1、抗菌肽(Antimicrobial peptides)是機體產(chǎn)生的一類能夠抑制微生物甚至癌細胞，并且對自身起到保護防御的小分子陽離子多肽?？咕膶ξ廴臼称返腉+和G-有較強的抑制作用，溶解性和穩(wěn)定性好，抗菌譜廣，極有潛力發(fā)展成為一種新型的天然食品防腐劑。本論文采用基因工程法表達三種抗菌肽，旨在為生產(chǎn)高活性、高產(chǎn)量的抗菌肽提供一種途徑。CFBD-1、UyCT5和Hispidalin分別來源于蠑螈皮膚分泌物、蝎子和冬瓜種子中，分子量分別為4

2、.5 KDa、1.4 KDa和5.7 KDa。
　　人工合成抗菌肽CFBD-1和UyCT5基因，將其分別克隆到大腸桿菌載體pMAL-c2X和pGEX-2T中，構建重組表達質(zhì)粒。再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞中，IPTG誘導融合蛋白表達。結(jié)果表明，在IPTG濃度為0.2 mmol/L，溫度為28℃，誘導時間為6h條件下，融合蛋白MBP-CFBD-1不完全表達，GST-UyCT5成功表達。體外抑菌實驗結(jié)果表明，GST-Uy

3、CT5對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌151-1、單增李斯特菌和沙門氏菌均無抑菌活性。隨后將抗菌肽基因Hispidalin和CFBD-1克隆到畢赤酵母表達載體pPICZαA中，構建重組表達質(zhì)粒。對重組質(zhì)粒SacⅠ酶線性化后，電轉(zhuǎn)入畢赤酵母GS115感受態(tài)細胞中，甲醇誘導融合蛋白表達。結(jié)果表明，在甲醇濃度為1％，250 mL搖瓶裝液量為25 mL，溫度為28℃，誘導時間為144h條件下，His-Hispidalin融合蛋白表達量為120.2

4、1μg/mL。His-CFBD-1未表達。體外抑菌實驗結(jié)果表明，His-Hispidalin融合蛋白對枯草芽孢桿菌151-1，L300-1，LZZ-133和單增李斯特菌有明顯的抑制作用。最小抑制濃度分別為75，67，83，75μg/mL。
　　最后，對誘導條件進行優(yōu)化，在甲醇濃度為0.5％，250 mL搖瓶裝液量為50 mL，溫度為28℃，誘導時間為120 h條件下，His-Hispidalin融合蛋白最高表達量為133.87μg