魚精蛋白的制備、純化及其絮凝和抑菌活性研究.pdf

1、魚精蛋白是一種聚陽離子肽，主要存在于各類動(dòng)物成熟的精巢組織中。魚精蛋白分子量很小，富含豐富的堿性氨基酸，主要是精氨酸和賴氨酸。目前對(duì)魚精蛋白的研究主要集中在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域，對(duì)魚精蛋白絮凝活性的研究還沒有報(bào)道。本文分別從鮭魚精巢和鯉魚精巢中提取出魚精蛋白，并對(duì)兩種魚精蛋白的抑菌活性進(jìn)行對(duì)比，同時(shí)研究魚精蛋白對(duì)微藻和微生物細(xì)胞的絮凝作用，探求魚精蛋白抑菌活性與絮凝活性的相關(guān)性。
　　1.首先對(duì)鮭魚精巢和鯉魚精巢的營養(yǎng)成分進(jìn)行分析測(cè)定，

2、結(jié)果表明鮭魚精巢和鯉魚精巢中均含有大量的蛋白質(zhì)和核酸，此外還含有灰分和少量脂肪，由此可見兩種魚精巢均是高蛋白質(zhì)高核酸低脂肪的產(chǎn)品。然后采取0.14mol/L的NaCl提取，7.5％的硫酸酸解抽提，95％的乙醇沉淀的方法提取魚精蛋白，采用濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定兩種魚精蛋白的抑菌活性，鮭魚魚精蛋白的抑菌活性要明顯高于鯉魚魚精蛋白的抑菌活性，且鮭魚魚精蛋白的抗菌譜更廣。從兩種魚精巢的氨基酸組分分析可以看出，鮭魚精巢分別富含7.62％的精氨酸和3.7

3、6％的賴氨酸，鯉魚精巢分別富含6.08％的精氨酸和4.45％的賴氨酸。
　　2.將提取的鮭魚魚精蛋白和鯉魚魚精蛋白用來絮凝微藻和微生物細(xì)胞，結(jié)果表明鮭魚魚精蛋白對(duì)鹽藻的絮凝作用最好，20μg/mL的魚精蛋白對(duì)鹽藻的絮凝率可以達(dá)到85.51％。鯉魚魚精蛋白對(duì)扁藻的絮凝效果較好，20μg/mL的魚精蛋白對(duì)扁藻的絮凝率可以達(dá)到85.00％。將鮭魚魚精蛋白絮凝后的鹽藻沉淀細(xì)胞和上清液分離，并對(duì)殘留在上清液中的鹽藻細(xì)胞進(jìn)行循環(huán)再培養(yǎng)和再絮凝

4、（三次），再次絮凝同樣可以得到較好的絮凝效果，觀察顯微鏡下的鹽藻沉淀細(xì)胞，沉淀細(xì)胞可以保持較好的活性和游動(dòng)狀態(tài)，同時(shí)鹽藻沉淀細(xì)胞也可以繼續(xù)培養(yǎng)。鯉魚魚精蛋白絮凝扁藻后的再培養(yǎng)和再絮凝情況與鹽藻相似。溫度處理對(duì)鮭魚魚精蛋白的絮凝活性沒有影響;但在溫度大于100℃的情況下，鯉魚魚精蛋白的絮凝活性減弱。蛋白酶處理使兩種魚精蛋白的絮凝活性均喪失。
　　3.采用抑菌效果較好的鮭魚魚精蛋白進(jìn)行性質(zhì)研究，研究表明魚精蛋白對(duì)革蘭氏陰性菌的最小抑菌

5、濃度要高于革蘭氏陽性菌的最小抑菌濃度，pH大于6.0時(shí)，魚精蛋白具有較好的抑菌活性，因此魚精蛋白適用于堿性食品中，而不適用于酸性食品中。溫度處理對(duì)鮭魚魚精蛋白的抑菌活性沒有影響，因此魚精蛋白可以用于巴氏殺菌和高壓滅菌的食品中，大大彌補(bǔ)了食品防腐劑應(yīng)用中的缺陷。魚精蛋白經(jīng)蛋白酶處理后抑菌活性完全喪失。
　　4.采用CM Sepharose Fast Flow陽離子交換層析對(duì)提取的鮭魚魚精蛋白和鯉魚魚精蛋白分別進(jìn)行分離純化，然后通過精

6、氨酸特征性反應(yīng)——坂口反應(yīng)以及SDS沉淀反應(yīng)對(duì)魚精蛋白進(jìn)行鑒定，鮭魚魚精蛋白經(jīng)過分離純化得到兩個(gè)活性峰，鯉魚魚精蛋白經(jīng)過純化得到一個(gè)活性峰。氨基酸組分測(cè)定結(jié)果表明，鮭魚魚精蛋白PEAKⅢ和PEAKⅣ分別富含賴氨酸和精氨酸，其中PEAKⅣ富含73.46％的精氨酸，PEAKⅢ富含37.36％的賴氨酸;鯉魚魚精蛋白PEAKⅢ富含39.24％的賴氨酸。對(duì)純化后的魚精蛋白進(jìn)行絮凝和抑菌實(shí)驗(yàn)，鮭魚魚精蛋白的PEAKⅢ和PEAKⅣ都具有抑菌活性，PE