魚精蛋白的制備、純化及其絮凝和抑菌活性研究.pdf

1、魚精蛋白是一種聚陽離子肽，主要存在于各類動物成熟的精巢組織中。魚精蛋白分子量很小，富含豐富的堿性氨基酸，主要是精氨酸和賴氨酸。目前對魚精蛋白的研究主要集中在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域，對魚精蛋白絮凝活性的研究還沒有報道。本文分別從鮭魚精巢和鯉魚精巢中提取出魚精蛋白，并對兩種魚精蛋白的抑菌活性進行對比，同時研究魚精蛋白對微藻和微生物細胞的絮凝作用，探求魚精蛋白抑菌活性與絮凝活性的相關(guān)性。
　　1.首先對鮭魚精巢和鯉魚精巢的營養(yǎng)成分進行分析測定，

2、結(jié)果表明鮭魚精巢和鯉魚精巢中均含有大量的蛋白質(zhì)和核酸，此外還含有灰分和少量脂肪，由此可見兩種魚精巢均是高蛋白質(zhì)高核酸低脂肪的產(chǎn)品。然后采取0.14mol/L的NaCl提取，7.5％的硫酸酸解抽提，95％的乙醇沉淀的方法提取魚精蛋白，采用濾紙片擴散法測定兩種魚精蛋白的抑菌活性，鮭魚魚精蛋白的抑菌活性要明顯高于鯉魚魚精蛋白的抑菌活性，且鮭魚魚精蛋白的抗菌譜更廣。從兩種魚精巢的氨基酸組分分析可以看出，鮭魚精巢分別富含7.62％的精氨酸和3.7

3、6％的賴氨酸，鯉魚精巢分別富含6.08％的精氨酸和4.45％的賴氨酸。
　　2.將提取的鮭魚魚精蛋白和鯉魚魚精蛋白用來絮凝微藻和微生物細胞，結(jié)果表明鮭魚魚精蛋白對鹽藻的絮凝作用最好，20μg/mL的魚精蛋白對鹽藻的絮凝率可以達到85.51％。鯉魚魚精蛋白對扁藻的絮凝效果較好，20μg/mL的魚精蛋白對扁藻的絮凝率可以達到85.00％。將鮭魚魚精蛋白絮凝后的鹽藻沉淀細胞和上清液分離，并對殘留在上清液中的鹽藻細胞進行循環(huán)再培養(yǎng)和再絮凝

4、（三次），再次絮凝同樣可以得到較好的絮凝效果，觀察顯微鏡下的鹽藻沉淀細胞，沉淀細胞可以保持較好的活性和游動狀態(tài)，同時鹽藻沉淀細胞也可以繼續(xù)培養(yǎng)。鯉魚魚精蛋白絮凝扁藻后的再培養(yǎng)和再絮凝情況與鹽藻相似。溫度處理對鮭魚魚精蛋白的絮凝活性沒有影響;但在溫度大于100℃的情況下，鯉魚魚精蛋白的絮凝活性減弱。蛋白酶處理使兩種魚精蛋白的絮凝活性均喪失。
　　3.采用抑菌效果較好的鮭魚魚精蛋白進行性質(zhì)研究，研究表明魚精蛋白對革蘭氏陰性菌的最小抑菌

5、濃度要高于革蘭氏陽性菌的最小抑菌濃度，pH大于6.0時，魚精蛋白具有較好的抑菌活性，因此魚精蛋白適用于堿性食品中，而不適用于酸性食品中。溫度處理對鮭魚魚精蛋白的抑菌活性沒有影響，因此魚精蛋白可以用于巴氏殺菌和高壓滅菌的食品中，大大彌補了食品防腐劑應(yīng)用中的缺陷。魚精蛋白經(jīng)蛋白酶處理后抑菌活性完全喪失。
　　4.采用CM Sepharose Fast Flow陽離子交換層析對提取的鮭魚魚精蛋白和鯉魚魚精蛋白分別進行分離純化，然后通過精

6、氨酸特征性反應(yīng)——坂口反應(yīng)以及SDS沉淀反應(yīng)對魚精蛋白進行鑒定，鮭魚魚精蛋白經(jīng)過分離純化得到兩個活性峰，鯉魚魚精蛋白經(jīng)過純化得到一個活性峰。氨基酸組分測定結(jié)果表明，鮭魚魚精蛋白PEAKⅢ和PEAKⅣ分別富含賴氨酸和精氨酸，其中PEAKⅣ富含73.46％的精氨酸，PEAKⅢ富含37.36％的賴氨酸;鯉魚魚精蛋白PEAKⅢ富含39.24％的賴氨酸。對純化后的魚精蛋白進行絮凝和抑菌實驗，鮭魚魚精蛋白的PEAKⅢ和PEAKⅣ都具有抑菌活性，PE