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1、囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)是一種典型的cAMP依賴的氯離子通道,在所有與分泌和吸收相關(guān)的上皮細(xì)胞內(nèi)表達(dá),CFTR的突變會(huì)引起多種疾病,因此CFTR成為治療CFTR突變引起的相關(guān)疾病的分子靶標(biāo)。近年來發(fā)現(xiàn),許多天然小分子化合物可以用來能夠治療CFTR突變引起的相關(guān)疾病,且比合成化合物具有更好的效果。實(shí)驗(yàn)前期利用熒光細(xì)胞測(cè)定模
2、型從天然小分子化合物庫中篩選出大量CFTR激活劑,選取其中的去氫木香內(nèi)酯和橘皮素作為研究對(duì)象,重點(diǎn)研究了二者對(duì)CFTR氯離子通道活性的影響,利用熒光細(xì)胞測(cè)定模型、跨膜短路電流測(cè)定、細(xì)胞內(nèi)cAMP水平測(cè)定和膜片鉗等技術(shù)研究了二者的具體作用機(jī)制,以期尋找到治療由于CFTR突變引起的相關(guān)疾病的藥物,同時(shí)實(shí)驗(yàn)還測(cè)定了二者對(duì)小鼠氣管粘膜下腺體液體分泌速度的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,黃酮類化合物橘皮素對(duì)野生型CFTR氯離子通道具有激活作用,萜類化合物去氫
3、木香內(nèi)酯對(duì)野生型CFTR和突變型△F508-CFTR氯離子通道均具有激活作用,并且激活作用均具有快速、可逆、劑量依賴等特點(diǎn),且均能夠被CFTR特異性抑制劑CFTRinh-172和GlyH101所抑制。兩者對(duì)小鼠粘膜下腺體液體分泌過程均有一定的促進(jìn)作用,能夠增加單位時(shí)間內(nèi)的粘液分泌量。膜片鉗測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),40μM橘皮素能夠明顯增強(qiáng)大鼠甲狀腺上皮細(xì)胞內(nèi)CFTR氯離子通道的開放程度。而在測(cè)定FRT細(xì)胞內(nèi)cAMP水平的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),去氫木香內(nèi)
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