畢赤酵母鼠李糖代謝途徑及鼠李糖誘導(dǎo)型啟動(dòng)子挖掘.pdf

1、隨著需求的增加，來(lái)源于天然菌株的目標(biāo)蛋白（如食品酶、環(huán)保酶、生物醫(yī)藥用酶）產(chǎn)量已嚴(yán)重不能滿足實(shí)際需要，改造生產(chǎn)菌株乃至構(gòu)建生物表達(dá)系統(tǒng)來(lái)高效生產(chǎn)外源蛋白已成為目前酶工程研究熱點(diǎn)。目前，眾多生物表達(dá)系統(tǒng)被用于外源蛋白的高效生產(chǎn)，其中畢赤酵母（Pichia pastoris）表達(dá)系統(tǒng)因操作簡(jiǎn)單、易培養(yǎng)、生長(zhǎng)周期短、蛋白表達(dá)量高等諸多優(yōu)點(diǎn)，成為目前應(yīng)用最廣泛的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)。在畢赤酵母表達(dá)載體中，應(yīng)用最廣泛的啟動(dòng)子是甲醇誘導(dǎo)型強(qiáng)啟動(dòng)子PAO

2、X1及組成型強(qiáng)啟動(dòng)子 PGAP。其中，誘導(dǎo)型啟動(dòng)子 PAOX1的弊端在于以甲醇為誘導(dǎo)劑，甲醇屬易燃物，在大規(guī)模發(fā)酵過(guò)程中，使用及存放都存在大型安全隱患；甲醇為有毒物，不能用于食品酶、生物醫(yī)藥等安全性要求極高的重組蛋白的生產(chǎn)。而 PGAP啟動(dòng)子使目的蛋白在整個(gè)發(fā)酵期間持續(xù)表達(dá)，難以精準(zhǔn)控制蛋白表達(dá)時(shí)序性；當(dāng)目的蛋白對(duì)宿主細(xì)胞生長(zhǎng)有損害時(shí)，則無(wú)法大量生產(chǎn)目的蛋白。因此，挖掘以無(wú)毒物質(zhì)為誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)型強(qiáng)啟動(dòng)子是目前完善畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的有效途

3、徑。
　　在本研究中，預(yù)測(cè)了畢赤酵母中4個(gè)鼠李糖代謝相關(guān)基因 PAS_chr_0338、PAS_chr_0339、PAS_chr_0340、LRA4（PAS_chr_0341）以及已被基因注釋為 L-鼠李糖脫水酶基因 LRA3（PAS_chr_0075），并確定了5個(gè)基因在基因組上的位置關(guān)系，其中PAS_chr_0338、PAS_chr_0339、PAS_chr_0340、LRA4毗鄰，而LRA3獨(dú)立存在。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，5個(gè)基因的