ZBTB8A互作蛋白的篩選及ZBTB6基因信息的初步研究.pdf

1、ZBTB蛋白是C2H2型鋅指蛋白家族的重要成員，作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄活性，廣泛地參與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，細(xì)胞增殖、分化及凋亡等生命活動(dòng)。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)RT-PCR從胃癌細(xì)胞AGS cDNA中克隆到一個(gè)ZBTB家族成員——ZBTB8A(Zinc finger and BTB domain containing 8A)(NM_001040441)。目前還未見(jiàn)ZBTB8A功能研究的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。我室前期研究結(jié)果表明ZBTB8A定位于1p

2、35.1，含有1326bp開(kāi)放閱讀框，編碼一個(gè)由441個(gè)氨基酸組成，分子量為50KD的蛋白。ZBTB8A蛋白N端含有一個(gè)BTB結(jié)構(gòu)域，C端含有兩個(gè)典型的C2H2型鋅指基序。同源性分析顯示該蛋白BTB結(jié)構(gòu)域和多個(gè)ZBTB家族成員的BTB結(jié)構(gòu)域是高度同源的。亞細(xì)胞定位分析顯示ZBTB8A定位于細(xì)胞核且呈斑點(diǎn)狀分布。
　　 蛋白質(zhì)間的相互作用存在于機(jī)體每個(gè)細(xì)胞的生命活動(dòng)過(guò)程中，它們控制著大量的細(xì)胞活動(dòng)事件，是生命活動(dòng)的基礎(chǔ)，一切生命活

3、動(dòng)幾乎都是通過(guò)蛋白質(zhì)之間的相互作用而實(shí)現(xiàn)的，對(duì)生命活動(dòng)過(guò)程中蛋白相互作用的研究有助于揭示生命過(guò)程的許多本質(zhì)問(wèn)題。我們采用酵母雙雜交技術(shù)從人胎腦cDNA文庫(kù)中篩選與ZBTB8A相互作用的蛋白質(zhì)，共篩選得到34種與ZBTB8A互作的新蛋白，并對(duì)其中一種蛋白質(zhì)SMARCB1（也稱(chēng)為INI1和BAF47）與ZBTB8A的相互作用進(jìn)行了進(jìn)一步的驗(yàn)證。
　　 我們成功地構(gòu)建了哺乳動(dòng)物表達(dá)載體pCMV-Myc-SMARCB1、pCMV-GST

4、-ZBTB8A、pCMV-GST- ZBTB8A-BTB和pCMV-GST- ZBTB8A-ZNF,此些融合蛋白在293T細(xì)胞中均可有效表達(dá)。哺乳動(dòng)物pull-down實(shí)驗(yàn)表明ZBTB8A與SMARCB1在293T中有相互作用，而ZBTB8A的BTB結(jié)構(gòu)域和ZNF結(jié)構(gòu)域均不與SMARCB1相互作用，說(shuō)明該相互作用依賴(lài)于ZBTB8A蛋白結(jié)構(gòu)的完整性。
　　 本實(shí)驗(yàn)室在研究ZBTB8A的同時(shí)，也關(guān)注另一個(gè)ZBTB家族成員——ZBTB

5、6(Zinc finger and BTB containing domain 6)(ZBTB26，ZID)。通過(guò)構(gòu)建綠色熒光蛋白融合表達(dá)載體pEGFP-ZBTB6對(duì)其進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析，結(jié)果顯示ZBTB6定位于細(xì)胞核，呈斑點(diǎn)狀分布。為鑒定ZBTB6蛋白BTB結(jié)構(gòu)域和鋅指結(jié)構(gòu)域?qū)ζ浼?xì)胞核定位的影響，構(gòu)建了一系列截短型ZBTB6與綠色熒光蛋白融合表達(dá)的重組質(zhì)粒進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析。結(jié)果顯示鋅指結(jié)構(gòu)域?qū)BTB6蛋白的細(xì)胞核定位起關(guān)鍵性作用，