生物素高產(chǎn)菌的篩選與育種研究.pdf

1、生物素是一種不能由人體合成的水溶性維生素,其參與體內(nèi)重要的蛋白質(zhì)和脂肪酸代謝。由于其重要的生物學(xué)作用,被廣泛地應(yīng)用到多個(gè)領(lǐng)域。本論文對生物素高產(chǎn)菌株的篩選和育種進(jìn)行了研究,研究內(nèi)容主要包括生長圈法篩選生物素產(chǎn)生菌株、生物素產(chǎn)生菌株的分類鑒定、生物素產(chǎn)生菌株的紫外線-氯化鋰復(fù)合誘變、高效液相色譜法檢測生物素產(chǎn)量和生物素高產(chǎn)基因工程菌的構(gòu)建。
　　 實(shí)驗(yàn)利用產(chǎn)氨短桿菌的營養(yǎng)需求,通過平板初篩和搖瓶復(fù)篩,獲得兩株產(chǎn)生物素能力較強(qiáng)且穩(wěn)定

2、的菌株,其中一株菌FD的生物素產(chǎn)量達(dá)到191.6μg/L。
　　 為了更好地了解菌株的功能和特性,對兩株產(chǎn)量較高的菌株FD和DJ①,通過菌株形態(tài)、生理生化特性以及菌株的16SrRNA基因序列分析對其進(jìn)行分類鑒定,將它們鑒定為假單胞菌Pseudomonassp.。
　　 采用紫外線-氯化鋰復(fù)合誘變,通過生物素類似物的抗性篩選,獲得菌株FD的一株突變菌,生物素產(chǎn)量為207μg/L。實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法檢測發(fā)酵液中生物素的含

3、量,其線性回歸方程為Y=9566.99695X-20893.30388,R2=0.9992,在15～200μg/mL的范圍內(nèi),其吸收峰面積y與生物素濃度x之間存在著良好的線性關(guān)系。
　　 實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了一個(gè)重組表達(dá)載體pBBR1MCS-5bioB,將該表達(dá)載體利用三親接合轉(zhuǎn)移法轉(zhuǎn)化到生物素產(chǎn)生菌假單胞菌FD中,構(gòu)建了工程菌。通過對該工程菌進(jìn)行轉(zhuǎn)錄水平上的檢測表明,重組表達(dá)載體pBBR1MCS-5bioB在工程菌中轉(zhuǎn)錄成功,最后用高效