粗糙脈孢菌高產(chǎn)番茄紅素促進劑的篩選、優(yōu)化及抗氧化活性的研究.pdf

1、番茄紅素屬于類胡蘿卜素中的一種，它是存在于天然植物中的色素?，F(xiàn)在學術已研究證實：番茄紅素擁有多種生理學作用：抗氧化、清除自由基、抗癌、增強免疫、延緩衰老、保護皮膚等作用，廣泛應用于食品、醫(yī)藥和化妝品等眾多領域。
　　1.本文探討了微生物發(fā)酵制得的色素提取液測定番茄紅素的方法，選擇C-18柱來測定番茄紅素的總量；紫外檢測波長為472 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫為28℃；進樣量為10μL；流動相乙腈-二氯甲烷的混合比例(V

2、/V)為60:40此時可最好的檢測出色素提取液中的番茄紅素。對番茄紅素標準品檢測后，得到番茄紅素保留時間為t=3.110，其標準曲線為y=24.602x-30.721(R2=0.9956)。用標準品加入色素提取液測其濃度計算可得回收率為95％-105%之間，故標準品實驗結果可信。
　　2.以微生物細胞內(nèi)生物合成番茄紅素途徑為機理，在發(fā)酵過程中添加發(fā)酵促進劑，這些發(fā)酵促進劑均可通過代謝調(diào)控使粗糙脈孢菌高產(chǎn)番茄紅素。以添加時間、添加量

3、為自變量，以菌絲和孢子的生物量、番茄紅素含量和番茄紅素產(chǎn)量為因變量進行單因素實驗，從檸檬酸、青霉素、煙草水提物、BHT和TH篩選出具有顯著影響的四種物質(zhì)。再通過響應面設計法優(yōu)化青霉素、煙草水提物、BHT和TH4個因素的對產(chǎn)物產(chǎn)量的影響，從響應面值可以知道四種物質(zhì)對粗糙脈孢菌發(fā)酵產(chǎn)番茄紅素量的影響程度為：煙草水提物＞TH＞青霉素＞BHT，最佳發(fā)酵助劑組成比例為：青霉素1.2 mg/L、煙草水提物102 mg/L、BHT3.8 mg/L、T

4、H1.01 mg/L，在此條件下，由響應面模擬預測番茄紅素總產(chǎn)量最高為13.59 mg/L。在驗證試驗中，得到番茄紅素總產(chǎn)量為13.50±0.65 mg/L，此值與響應面結果所得的預測值相差不多。此培養(yǎng)方法為微生物發(fā)酵法提供相應工藝。
　　3.本文采用有機溶劑結合超聲破碎法提取菌體細胞中的番茄紅素，超聲破碎菌體后選用丙酮和乙酸乙酯溶劑提取番茄紅素，單因素試驗表明番茄紅素在浸提溫度65℃，浸提時間2.5 h，溶劑配比1:2(乙酸乙酯

5、:丙酮，V/V)的條件下，番茄紅素的得率最高。響應面實驗進一步確定了番茄紅素的提取條件：番茄紅素在浸提溫度為66.66℃，浸提時間2.51 h，溶劑配比0.64(乙酸乙酯:丙酮，V/V)的條件下得率最高。
　　4.由粗糙脈孢菌發(fā)酵得到番茄紅素粗提物、β-胡蘿卜素標品、VC、VE的DPPH·自由基清除能力順序為：β-胡蘿卜素＞VC＞番茄紅素粗提物＞VE；超氧陰離子自由基O2－?清除能力順序為：番茄紅素粗提物＞β-胡蘿卜素＞VC＞VE