小鼠卵巢不同發(fā)育階段的轉(zhuǎn)錄組學研究.pdf

1、工作目的:卵巢作為雌性哺乳動物的生殖器官，發(fā)揮排卵和分泌類固醇激素的功能，卵巢及其中生殖細胞的發(fā)育具有相當?shù)膹碗s性與重大的意義，迄今為止，其發(fā)育過程中還有許多機制和調(diào)控機理仍不甚明了。本實驗將進行小鼠卵巢及生殖細胞關鍵發(fā)育時期卵巢組織的轉(zhuǎn)錄組學研究，通過最新的數(shù)字基因表達譜升級版測序（RNA-Seq）及相關生物信息學分析，找出與卵巢和生殖細胞發(fā)育相關的基因及分子，為揭示卵巢發(fā)育及功能衰老的機制和相關機理提供有用的線索。
　　 研

2、究方法:考慮到卵巢和生殖細胞發(fā)育的系統(tǒng)性與復雜性，我們將首次全面而系統(tǒng)地將生殖細胞的增殖、形成生殖包囊，到包囊重組產(chǎn)生原始卵泡，以及原始卵泡的早期發(fā)育形成初級卵泡，至次級卵泡，最后與卵巢中卵泡基本耗竭的老年小鼠卵巢聯(lián)系起來;選取涉及上述卵巢及生殖細胞發(fā)育關鍵事件時間點的小鼠卵巢組織，包括胚胎發(fā)育第12.5天、出生后第2天，第5天、第10天以及老年小鼠卵巢組織;首先對每個階段卵巢組織發(fā)生的關鍵發(fā)育事件進行驗證分析，然后進行卵巢（生殖嵴）組

3、織水平的數(shù)字基因表達譜升級版測序(RNA-Seq)及相關信息分析，從而找出與卵巢和生殖細胞發(fā)育相關的基因及分子。
　　 成果:(1)成功地全面系統(tǒng)驗證了實驗中所取各階段卵巢（生殖嵴）組織的關鍵發(fā)育特點。結(jié)果顯示在胚胎發(fā)育第12.5天的生殖嵴中，有大部分的生殖細胞正進行增殖，并以生殖包囊的形式存在;在出生后第2天的小鼠卵巢中，有著大量位置相鄰、接觸緊密的原始卵泡，表明生殖包囊剛完成重組形成了原始卵泡;在第5天的小鼠卵巢中，原始卵泡

4、仍占有大部分比例，但也有大量的初級卵泡處于發(fā)育之中;在出生后第10天的卵巢中同時具有原始卵泡、初級卵泡和次級卵泡的發(fā)育;而老年小鼠（16個月）的卵巢中已基本沒有卵泡;
　　 (2)整個實驗中鑒定出有表達的基因有18915個，占小鼠基因總數(shù)的63.05％，我們從中得到了大量測序質(zhì)量良好的差異表達基因;
　　 (3)我們完成了差異表達基因的初步篩選和富集工作，進行了一些生殖發(fā)育相關基因的特性描述，分析了實驗中每個時期的階段特