RKC-α和PKC-δ在不同發(fā)育階段小鼠睪丸中的差異性表達(dá).pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文RKCα和PKCδ在不同發(fā)育階段小鼠睪丸中的差異性表達(dá)姓名：馮晨申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：于秉治2000.4.1實(shí)驗(yàn)材料與方法本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用免疫組化、Western印跡雜交及RT一PCR等方法檢測(cè)了出生后1周齡、2周齡、3周齡、5周齡、8周齡、12周齡雄性昆明系小白鼠皋丸組織中PKCa和PKC8的表達(dá)。1.Western印跡雜交:用PKC一a和PKC一8特異性抗體檢測(cè)各周齡小鼠辜丸組織蛋白

2、提取液中PKC一。和PKC一8蛋白表達(dá)數(shù)量。2.免疫組織化學(xué)檢測(cè):各周齡小鼠翠丸組織常規(guī)固定，石蠟包埋，切片，用兔抗鼠PKC一a和PKC一8的特異性抗體和過(guò)氧化氫酶標(biāo)記的鏈酶卵白素(SP)染色試劑盒檢測(cè)PKC一a和PKC一8的蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞。3.RT一PCR半定量測(cè)定:用TRIzol總RNA提取試劑提取皋丸組織總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成，DNA第一鏈，分別擴(kuò)增PKC一aPKC一8的PCR產(chǎn)物，檢測(cè)兩者mRNA相對(duì)含量。4.統(tǒng)計(jì)分析:運(yùn)用單因

3、素方差分析判斷是否各組總體均數(shù)全部相等各組均數(shù)間兩兩比較運(yùn)用LSD方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.Western印跡雜交結(jié)果:各周齡樣品均可見(jiàn)PKC一a的表達(dá)，且掃描灰度值基本一致生后1周齡2周齡拿丸樣品中PKC一8蛋白幾乎無(wú)表達(dá)，第三周開(kāi)始出現(xiàn)微弱表達(dá)，以后隨周齡增加掃描灰度值逐漸增加。2.免疫組化結(jié)果:各周齡小鼠的皋丸中均可見(jiàn)到PKC一a的表達(dá)且分布廣泛，各組間無(wú)差異(P0.05)生后兩周小鼠辜丸中無(wú)PKC一S的表達(dá)，第三周開(kāi)始在管腔側(cè)出現(xiàn)少量陽(yáng)