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文檔簡介
1、目的:觀察出生后不同發(fā)育階段大鼠穹窿下器(subfornicalorgan,SFO)的Sox2陽性細胞的形態(tài)及分布特征,觀察其表達情況。
方法:雄性健康SD大鼠,分為幼年組和成年組,每組各24只,清潔級,實驗動物不作任何處理。
1、標本制備
常規(guī)動物標本制備:將兩組實驗動物用水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉后,自主動脈灌注4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L,PH7.2)進行前固定,立即取腦,進行
2、后固定。將組織標本經脫水,透明,包埋,選取含穹窿下器部分,石蠟切片機冠狀面切片,厚度約為5μm,制成石蠟切片。對實驗動物的處置符合動物倫理學要求。
2、染色
常規(guī)免疫組織化學染色:將上述石蠟切片經Sox2染色,使用中性樹膠封片后,顯微鏡觀察、照相。
3、統(tǒng)計學處理
選取相同SFO的橫斷面,使用多媒體真彩病理圖文分析系統(tǒng),在20倍鏡下,通過計數SFO內細胞總數和Sox2陽性細胞數,計算出陽性細胞率,
3、計量資料均采用(x)±s表示。
結果:
1、不同發(fā)育階段大鼠Sox2陽性細胞在SFO的分布。
幼年組大鼠的SFO,腹側部的室管膜Sox2陽性細胞排列整齊而密集,中央部的室管膜陽性細胞多為雙層,也有呈現(xiàn)單層,外側部的多為三層,甚至多層排列。背側部有稀疏的Sox2弱陽性細胞散在分布。外側部大血管周圍有密集的強陽性細胞,且陽性細胞多位于血管的腹側,甚至延伸至兩血管之間,大血管的背側多為陰性細胞散在分布。中央部有密
4、集的Sox2免疫陽性細胞。中央部可見細小的血管,周圍多為Sox2陰性細胞。
成年組大鼠的SFO,腹側部的Sox2陽性細胞較密集,室管膜及室管膜下有密集的強陽性細胞,靠近中央部室管膜的陽性細胞排列為雙層或單層,外側部的為三層,甚至多層排列。背側部Sox2陽性細胞較稀疏,散在分布。外側部大血管周圍未見密集的強陽性細胞。在中央部可見強陽性細胞和弱陽性細胞散在分布,偶見胞核巨大的陽性細胞。中央部可見細小的血管,周圍多為Sox2陰性細胞
5、。
2、不同發(fā)育階段大鼠SFO中Sox2陽性細胞的形態(tài)特征。
在幼年組大鼠的SFO,可見強陽性細胞,細胞核為深褐色,室管膜及室管膜下的陽性細胞,細胞核較小,多為圓形或卵圓形,大小為3.7μm~5.3μm*2.6μm~5.4μm,大血管之間的強陽性細胞核為長橢圓形或長條形,大小為3.3μm~9.4μm*2.5μm~3.3μ m;中央部弱陽性細胞細胞核為淺褐色,圓形或卵圓形,大小為6.1μm~7.5μm*3.8μm~7.
6、1μm,偶見細胞核大小為11.1μm~12.7μm*8.3μm~9.2μm的弱陽性細胞。
在成年組大鼠的SFO,可見強陽性細胞,細胞核為深褐色,室管膜及室管膜下的陽性細胞核較小,多為圓形或卵圓形,大小為3.3μm~5.5μm*2.8μm~5.8μm,中央部的強陽性細胞核為橢圓形或長條形,大小為1.3μm~2.0μm*3.4μm~5.0μm;中央部的弱陽性細胞細胞核為淺褐色,多為圓形或卵圓形,大小為3.7μm~5.3μm*3.9
7、μm~6.9μm,偶見細胞核大小為8.3μm~9.6μm*13.9μm~14.2μm的弱陽性細胞。
3、不同發(fā)育階段Sox2陽性細胞分布的比較。
幼年組SD大鼠穹窿下器Sox2陽性細胞率為65.58%±4.23%,成年組為52.13%±6.56%。兩組的數據比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。
4、在成年組SD大鼠SFO的背外側附近發(fā)現(xiàn)Sox2陽性細胞的分裂相。其左下方處,即室管膜下區(qū),可見一同一類型的神經細
8、胞相互連接成鏈。
5、在幼年組SD大鼠SFO的腹側室管膜處可見Sox2強陽性細胞簇,由4個強陽性細胞組成。其背側為三個形態(tài)一致,大小為4.0μm~5.6μm*3.0μm~1.7μm的細胞核,腹側核為長條形,大小為5.5μm*1.7μm。
結論:
1、Sox2陽性細胞,在幼年SD大鼠的SFO中表達數量多于成年SD大鼠的SFO中表達數量。
2、幼年和成年SD大鼠SFO中Sox2陽性表達細胞背側部稀疏,
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