藏藥二十五味珊瑚丸化學(xué)成分分析及神經(jīng)保護(hù)作用物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、二十五味珊瑚丸是經(jīng)典的藏藥驗(yàn)方，屬于藏醫(yī)珍寶類藥品，收載于藏醫(yī)經(jīng)典著作《四部醫(yī)典》中，在公元18世紀(jì)由藏醫(yī)學(xué)創(chuàng)使人宇拓·元丹貢布創(chuàng)制，目前被《中國藥典》（2010版）收載。它具有清熱定驚、開竅通絡(luò)、止痛等功效，用于治療“白脈病”，即中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如頭疼、癲癇等。該方雖然已有上千年的使用歷史，但是，至目前為止，其生物活性物質(zhì)、體內(nèi)代謝物及活性作用機(jī)理等仍不明確。二十五味珊瑚丸藥效科學(xué)依據(jù)的缺乏，阻礙了其在臨床上的運(yùn)用和進(jìn)一步發(fā)展;另外

2、，2010版藥典中對(duì)二十五味珊瑚丸只有簡單的化學(xué)反應(yīng)和西紅花、紅花主要成分的薄層色譜鑒別以及烏頭堿的限量測(cè)定，涉及的藥材少，代表性不足，缺乏組方藥材的質(zhì)控指標(biāo)及定量標(biāo)準(zhǔn)，難以保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定和用藥的安全有效，因此，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待完善和提高。
　　本研究采用UPLC-DAD/Q-TOF-MS、HPLC-ELSD、ICP-MS、GC-MS等多種聯(lián)用技術(shù)，對(duì)二十五味珊瑚丸全方進(jìn)行了系統(tǒng)的成分分析。采用UPLC-DAD/Q-TOF-MS

3、建立了全方的液相指紋圖譜，從中鑒定出6大類61個(gè)成分，歸屬于11味植物藥材;用HPLC柱前衍生化法對(duì)全方中氨基酸類成分進(jìn)行了分析，測(cè)定了15種氨基酸，其主要來自葫蘆藥材;用ICP-MS分析了全方中結(jié)合態(tài)、游離態(tài)和固態(tài)礦物元素，共測(cè)定了22種元素，其中常量元素4種，微量元素18種，主要來自10味礦物藥材;用HPLC-ELSD分析全方游離糖和水解總糖的含量，測(cè)定了果糖和葡萄糖的含量;用GC-MS鑒定了全方中揮發(fā)性成分，共鑒定了3大類18個(gè)揮

4、發(fā)性成分，歸屬于5味藥材。在全方組方藥材的研究方面，對(duì)于方中重要藥材藏菖蒲及其易混淆藥材石菖蒲，采用近紅外技術(shù)對(duì)兩者進(jìn)行了區(qū)分，并測(cè)定了藥材中主要成分的含量;用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)比較了草烏和鐵棒錘的指紋圖譜，同時(shí)比較分析了草烏與甘草、訶子配伍前后指紋圖譜中雙酯型烏頭堿含量的變化，為全方用草烏替代鐵棒錘的合理性及全方用甘草、訶子同時(shí)與草烏配伍的合理性提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。在全方物質(zhì)基礎(chǔ)研究中，同時(shí)采用體外和體內(nèi)研究方法通過OGD-R誘導(dǎo)的SH-SY5

5、Y細(xì)胞損傷模型對(duì)全方藥效物質(zhì)進(jìn)行了篩選;在體外研究中，通過提取和分析，得到二十五味珊瑚丸不同提取層的主要物質(zhì)信息，然后結(jié)合各提取層在不同濃度下的活性測(cè)定結(jié)果，用人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)對(duì)提取層中潛在的藥效物質(zhì)進(jìn)行了虛擬篩選;在體內(nèi)研究中，采用血清藥物化學(xué)的方法，用UPLC-DAD/Q-TOF-MS從灌胃后大鼠的血樣、心、肝、腎和腦組織中共檢測(cè)了36個(gè)主要外源性成分，包括20個(gè)原型藥物和16個(gè)代謝物。結(jié)合體外虛擬篩選的結(jié)果和體內(nèi)入血成分的測(cè)定結(jié)果，初

6、步確定了主要的藥效成分，并進(jìn)行了單體活性驗(yàn)證;同時(shí)結(jié)合分子反向?qū)蛹夹g(shù)，對(duì)主要藥效成分可能的靶點(diǎn)及相關(guān)通路進(jìn)行了預(yù)測(cè)。
　　通過本研究，基本講清了二十五味珊瑚丸的化學(xué)組成，采用不同的分析方法對(duì)全方中主要成分的含量測(cè)定，特別是對(duì)各藥材特征成分的含量測(cè)定，有助于二十五味珊瑚丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善和提高。從全方的體外虛擬活性篩選和體內(nèi)入血成分檢測(cè)兩個(gè)方面，確定了二十五味珊瑚丸的主要藥效成分，為今后在分子水平上進(jìn)一步研究其作用機(jī)理提供了重要的物