藏藥二十五味珊瑚丸化學成分分析及神經保護作用物質基礎研究.pdf

1、二十五味珊瑚丸是經典的藏藥驗方，屬于藏醫(yī)珍寶類藥品，收載于藏醫(yī)經典著作《四部醫(yī)典》中，在公元18世紀由藏醫(yī)學創(chuàng)使人宇拓·元丹貢布創(chuàng)制，目前被《中國藥典》（2010版）收載。它具有清熱定驚、開竅通絡、止痛等功效，用于治療“白脈病”，即中樞神經系統疾病，如頭疼、癲癇等。該方雖然已有上千年的使用歷史，但是，至目前為止，其生物活性物質、體內代謝物及活性作用機理等仍不明確。二十五味珊瑚丸藥效科學依據的缺乏，阻礙了其在臨床上的運用和進一步發(fā)展;另外

2、，2010版藥典中對二十五味珊瑚丸只有簡單的化學反應和西紅花、紅花主要成分的薄層色譜鑒別以及烏頭堿的限量測定，涉及的藥材少，代表性不足，缺乏組方藥材的質控指標及定量標準，難以保證產品質量的穩(wěn)定和用藥的安全有效，因此，其質量標準有待完善和提高。
　　本研究采用UPLC-DAD/Q-TOF-MS、HPLC-ELSD、ICP-MS、GC-MS等多種聯用技術，對二十五味珊瑚丸全方進行了系統的成分分析。采用UPLC-DAD/Q-TOF-MS

3、建立了全方的液相指紋圖譜，從中鑒定出6大類61個成分，歸屬于11味植物藥材;用HPLC柱前衍生化法對全方中氨基酸類成分進行了分析，測定了15種氨基酸，其主要來自葫蘆藥材;用ICP-MS分析了全方中結合態(tài)、游離態(tài)和固態(tài)礦物元素，共測定了22種元素，其中常量元素4種，微量元素18種，主要來自10味礦物藥材;用HPLC-ELSD分析全方游離糖和水解總糖的含量，測定了果糖和葡萄糖的含量;用GC-MS鑒定了全方中揮發(fā)性成分，共鑒定了3大類18個揮

4、發(fā)性成分，歸屬于5味藥材。在全方組方藥材的研究方面，對于方中重要藥材藏菖蒲及其易混淆藥材石菖蒲，采用近紅外技術對兩者進行了區(qū)分，并測定了藥材中主要成分的含量;用液質聯用技術比較了草烏和鐵棒錘的指紋圖譜，同時比較分析了草烏與甘草、訶子配伍前后指紋圖譜中雙酯型烏頭堿含量的變化，為全方用草烏替代鐵棒錘的合理性及全方用甘草、訶子同時與草烏配伍的合理性提供了實驗依據。在全方物質基礎研究中，同時采用體外和體內研究方法通過OGD-R誘導的SH-SY5

5、Y細胞損傷模型對全方藥效物質進行了篩選;在體外研究中，通過提取和分析，得到二十五味珊瑚丸不同提取層的主要物質信息，然后結合各提取層在不同濃度下的活性測定結果，用人工神經網絡對提取層中潛在的藥效物質進行了虛擬篩選;在體內研究中，采用血清藥物化學的方法，用UPLC-DAD/Q-TOF-MS從灌胃后大鼠的血樣、心、肝、腎和腦組織中共檢測了36個主要外源性成分，包括20個原型藥物和16個代謝物。結合體外虛擬篩選的結果和體內入血成分的測定結果，初

6、步確定了主要的藥效成分，并進行了單體活性驗證;同時結合分子反向對接技術，對主要藥效成分可能的靶點及相關通路進行了預測。
　　通過本研究，基本講清了二十五味珊瑚丸的化學組成，采用不同的分析方法對全方中主要成分的含量測定，特別是對各藥材特征成分的含量測定，有助于二十五味珊瑚丸質量標準的完善和提高。從全方的體外虛擬活性篩選和體內入血成分檢測兩個方面，確定了二十五味珊瑚丸的主要藥效成分，為今后在分子水平上進一步研究其作用機理提供了重要的物