二甲雙胍聯(lián)合順鉑對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖、侵襲遷移的影響.pdf

1、目的：
　　鼻咽癌是頭頸部常見(jiàn)的惡性腫瘤，在我國(guó)南方發(fā)病率較高，由于發(fā)病位置隱蔽，臨床癥狀不明顯，診斷較困難，預(yù)后較差。通過(guò)檢測(cè)二甲雙胍(Metformin)聯(lián)合順鉑(Cisplatin, DDP)對(duì)人鼻咽癌低分化細(xì)胞株CNE-2增殖和侵襲遷移能力的影響,初步研究二甲雙胍對(duì)鼻咽癌細(xì)胞凋亡及侵襲抑制的作用機(jī)制，探討二甲雙胍作為潛在性抗腫瘤藥物的可行性。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞，Met組給與不同藥

2、物濃度(0、1、5、10、20、40mmol/L), DDP組(0、0.5、1、2、4、8mg/L),分別處理細(xì)胞24h、48h、72h，MMT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。根據(jù)之前細(xì)胞增殖情況，分別選擇最佳藥物濃度，DDP(2mg/L)、Met(20mmol/L)、聯(lián)合組(Met20mmol/L+DDP2mg/L),繼續(xù)培養(yǎng),MTT法觀察細(xì)胞24h、48h、72h增殖情況。
　　2.BoydenChamber實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同處理組Met(20

3、mmol/L)、DDP(2mg/L)、Met(20mmol/L)+ DDP(2mg/L)的CNE-2細(xì)胞侵襲情況以及兩者聯(lián)合應(yīng)用處理細(xì)胞觀察細(xì)胞侵襲能力差異。
　　3.劃痕實(shí)驗(yàn)觀察Met(20mmol/L)、DDP(2mg/L)及兩者聯(lián)合處理CNE-2細(xì)胞24h后細(xì)胞遷移情況以及兩者聯(lián)合應(yīng)用處理細(xì)胞觀察細(xì)胞遷移能力差異。
　　4. Met(20mmol/L、40mmol/L)處理CNE-2細(xì)胞24h，流式細(xì)胞技術(shù)觀察細(xì)胞凋亡

4、情況。
　　5.蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)Met(20mmol/L、40mmol/L)處理CNE-2細(xì)胞48h后GAPDH（內(nèi)參）、caspase-3、cleaved-PARP、Vim、MMP-9的表達(dá)情況的變化。
　　結(jié)果：
　　1.MTT結(jié)果顯示：不同濃度Met和DDP對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE-2均具有顯著的增殖抑制作用，二者聯(lián)合使用抑制作用明顯增加。
　　2.侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：不同濃度Met和

5、DDP對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE-2均有侵襲遷移抑制作用，聯(lián)合用藥遷移抑制率較單用DDP更加顯著。
　　3.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：不同濃度Met和DDP對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE-2均有遷移抑制作用，聯(lián)合用藥遷移抑制率較單用DDP更加顯著。
　　4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，二甲雙胍20mmol/L、40mmol/L處理 CNE-2細(xì)胞后細(xì)胞凋亡率達(dá)到7.03％、12.49%，較對(duì)照組（2.02%）存在顯著差異（p＜0.05）。
　　5.蛋

6、白印跡試驗(yàn)結(jié)果顯示：caspase-3、MM-9、Vim表達(dá)下降，E-cadherin、cleaved-PARP表達(dá)升高。
　　結(jié)論：
　　1．二甲雙胍能增強(qiáng)順鉑對(duì)鼻咽癌細(xì)胞殺傷作用。
　　2．二甲雙胍能抑制CNE-2細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移。
　　3．二甲雙胍能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。凋亡可能與關(guān)鍵凋亡蛋白caspase-3激活，酶解PARP(poly ADP-ribose polymerase)影響細(xì)胞穩(wěn)定性，促進(jìn)凋亡。