二甲雙胍對(duì)人網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞中v-SNAREs家族表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　觀察二甲雙胍對(duì)人成熟脂肪細(xì)胞中囊泡相關(guān)可溶性N-乙?；鶃啺访舾幸蜃痈街鞍资荏w（vescical-souble N-ethymaleimide sensitive factor attachment proteins receptor, v-SNAREs）家族成員VAMP2、3、4、5、7、8表達(dá)的影響。
　　方法：
　　1.選擇擇期開(kāi)腹手術(shù)病人，術(shù)中無(wú)菌條件切取腹部大網(wǎng)膜脂肪組織，采用膠原酶消化法分離前脂

2、肪細(xì)胞。于37℃、5％CO2條件下DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并誘導(dǎo)其分化為成熟脂肪細(xì)胞，用油紅O染色鑒定證實(shí)。
　　2.予不同濃度二甲雙胍（0mM，1mM，10mM）干預(yù)成熟脂肪細(xì)胞24h后，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光相對(duì)定量PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞VAMP2、3、4、5、7、8mRNA的表達(dá)水平。
　　3.使用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差( x±s)表示，樣本間均數(shù)比較采用配對(duì)樣本T檢驗(yàn)，以P<0.

3、05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
　　結(jié)果：
　　1.成功進(jìn)行了人前脂肪細(xì)胞的原代培養(yǎng)，并誘導(dǎo)其分化為成熟脂肪細(xì)胞。
　　2.RT-PCR結(jié)果：與對(duì)照組（0mM二甲雙胍）相比，1mM二甲雙胍上調(diào)脂肪細(xì)胞VAMP4、5、8水平(分別P<0.05，P<0.05，P<0.05，)，下調(diào)VAMP3、7水平（分別P<0.05，P<0.01），VAMP2表達(dá)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與對(duì)照組相比10mM二甲雙胍上調(diào)脂肪細(xì)胞VAMP4、5、8水平(

4、分別P<0.01，P<0.01，P<0.01)，下調(diào)VAMP7水平（P<0.01），VAMP2、3表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；10mM二甲雙胍干預(yù)組與1mM組比較， VAMP3、4、5、8表達(dá)水平升高（P<0.05，P<0.05，P<0.05，P<0.01）， VAMP2、7表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.使用膠原酶消化法分離并原代培養(yǎng)了人大網(wǎng)膜前脂肪細(xì)胞，并成功的誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞，驗(yàn)證了本實(shí)驗(yàn)室建立的前脂肪細(xì)胞