蛋白酶活化受體1與實驗性腦出血大鼠腦血管新生的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：通過建立大鼠腦出血（intracerebral hemorrhage,ICH）模型，探討蛋白酶活化受體1(protease-activated receptor-1,PAR1)與大鼠腦出血后腦血管新生的相關(guān)性，以期為腦出血的治療及康復(fù)提供新的思路。
　　方法：1、動物分組：將100只SD大鼠隨機分為3組，即假手術(shù)組(Sham組)(n=25)，腦出血組(ICH組)(n=25)，ICH+PAR1抑制劑組(PI組)(n=50)；其

2、中PI組又隨機分為兩個亞組：ICH+高劑量PAR1抑制劑組[PI(H)組](n=25)，ICH+低劑量PAR1抑制劑組[PI(L)組](n=25)。每組再隨機均分為1d、3d、7d、14d、21d五個時間點。2、模型建立：斷尾取大鼠未抗凝自體血50ul，利用鼠腦立體定位儀，將自體血注入鼠腦右側(cè)基底節(jié)區(qū)建立腦出血模型，假手術(shù)組只插針不注血。3、給藥方法：PAR1抑制劑組在造模成功后2h給予PAR1特異性抑制劑SCH79797[PI(H)組

3、250ug/Kg、PI(L)組25ug/Kg]，溶于2ml生理鹽水進行腹腔注射，其余組腹腔注射等量生理鹽水。4、觀察指標：于術(shù)后1d、3d、7d、14d、21d用改良神經(jīng)功能缺損（modified neurological severity score，mNSS）量表進行神經(jīng)功能評分，評分越高代表神經(jīng)功能缺損越嚴重；評分后在相應(yīng)時間點處死大鼠，采用干濕重法測定1d、3d、7d時間點血腫周圍的腦組織含水量；HE染色法觀察各時間點血腫周圍腦

4、組織微血管；用免疫組化方法測定各時間點血腫周圍血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）陽性細胞數(shù)及血管性血友病因子（von Willebrand factor,vWF）陽性的微血管密度（microvessel density，MVD）。
　　結(jié)果：1.神經(jīng)功能評分：①Sham組大鼠未出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙。②ICH及PI組在腦出血造模術(shù)后均有不同程度神經(jīng)功能缺損，各組均在3d時間

5、點神經(jīng)功能評分最高；隨時間延長，神經(jīng)功能逐漸恢復(fù)(P<0.05)。③PI(H)組與ICH組比較，各時間點神經(jīng)功能評分明顯升高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。④PI(L)組與ICH組比較，各時間點神經(jīng)功能評分明顯降低，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。2.腦組織含水量：①ICH組和PI組大鼠血腫周圍腦組織含水量均明顯高于Sham組，各腦出血實驗組均在3d達水腫高峰。②在1d、3d、7d各時間點PI(H)組腦組織含水量明顯高于I

6、CH組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。③在1d、3d、7d各時間點PI(L)組腦組織含水量明顯低于ICH組；差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3.HE染色觀察血管新生情況：①Sham組各時間點可見針孔周圍的腦組織結(jié)構(gòu)均勻一致，偶見少量微血管。②ICH及PI組各時間點可見不同程度的血管內(nèi)皮細胞、血管樣結(jié)構(gòu)及微血管增多，14d時增多最明顯；與同時間點Sham組比較，ICH組及PI組新生血管結(jié)構(gòu)均明顯增多。③PI(H)組與ICH組

7、比較，PI(H)組新生血管較ICH組減少。④PI(L)組與ICH組比較，PI(L)組新生血管較ICH組明顯增多。4.VEGF陽性細胞數(shù)：①腦出血造模術(shù)后1d、3d、7d、14d、21d，ICH組及PI組VEGF表達均明顯高于Sham組(P<0.05)。②ICH組、PI組于腦出血造模術(shù)后1d VEGF表達開始增多，14d達高峰。
　?、跴I(H)組與ICH組比較，各時間點VEGF陽性細胞數(shù)減少，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

8、④PI(L)組與ICH組比較，各時間點VEGF陽性細胞數(shù)明顯增多，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。5.vWF標記的MVD：①腦出血造模術(shù)后1d、3d、7d、14d、21d，ICH組及PI組MVD均明顯高于Sham組(P<0.05)。②ICH組、PI組于腦出血造模術(shù)后1d MVD開始增多，14d達高峰。③PI(H)組與ICH組比較， PI(H)組各時間點MVD較ICH組減少，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。④PI(L)組與IC

9、H組比較，PI(L)組各時間點MVD較ICH組明顯增多，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.利用未抗凝自體血注入法建立大鼠腦出血模型與人腦出血生理病理過程較相似，且不改變血液中凝血酶等PAR1激活物的活性，是開展本實驗理想的動物模型。2.適當抑制PAR1可減輕實驗性腦出血大鼠腦水腫程度。3.適當抑制PAR1可能通過上調(diào)VEGF表達從而促進實驗性腦出血大鼠腦血管新生。4.適當抑制PAR1有利于實驗性腦出血大鼠神經(jīng)功