實驗性大鼠腦出血血腫周圍組織膠質(zhì)細(xì)胞纖維酸性蛋白的動態(tài)表達(dá).pdf

1、本研究擬通過對腦出血大鼠不同時間點血腫周圍組織GFAP的動態(tài)表達(dá)以及腦組織含水量的動態(tài)變化，探討其可能的變化機(jī)理與損傷時間的關(guān)系，為進(jìn)一步認(rèn)識星形膠質(zhì)細(xì)胞在顱腦損傷及神經(jīng)修復(fù)中的作用機(jī)制提供實驗依據(jù)。 研究方法：利用立體定向技術(shù)，建立SD大鼠尾殼核自體動脈血腦出血模型(70μl)，并在腦出血后6h、12h、24h、48h、72h、7d對大鼠進(jìn)行行為學(xué)評分，包括Longa評分法(LongaScore)、Berderson評分法(B

2、erdersonScore)。之后大鼠斷頭處死，用干濕重法測相應(yīng)時間點的腦組織含水量。腦組織含水量測定法(干濕重法)，腦組織含水量按以下公式計算：腦組織含水量=(腦組織濕重-腦組織干重)/濕重×100％，干濕重均測，精確到0.1mg。假手術(shù)組大鼠只進(jìn)針不注血，余操作同腦出血組大鼠。生理鹽水組注入70μl生理鹽水，余操作同腦出血組大鼠。采用免疫組化SP法觀察出血后6h、12h、24h、48h、72h、7d大鼠腦組織的GFAP的表達(dá)情況；探

3、討其表達(dá)規(guī)律；常規(guī)HE染色觀察大鼠腦組織的病理改變，觀察基底節(jié)區(qū)域的血腫及其周圍的水腫帶，神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的改變。 研究結(jié)果：①腦出血后行為學(xué)的改變：ICH后大鼠在不同時間點出現(xiàn)行為學(xué)異常。所有腦出血組和鹽水組大鼠術(shù)后6h、12h行為學(xué)評分都高，可能是由于藥物麻醉和手術(shù)創(chuàng)傷所致，沒有特殊意義。出血后24h評分明顯升高，48h達(dá)高峰，并持續(xù)到72h。早期生理鹽水組評分高于假手術(shù)組48h到72h時后兩組沒有差別，提示行為學(xué)異常與腦損

4、害程度一致。②腦組織含水量測定結(jié)果：大鼠自體動脈血ICH后24h開始，患側(cè)腦組織含水量高于同側(cè)腦組織及對照組，48h達(dá)高峰，并持續(xù)到72h，至7d大致恢復(fù)正常，腦出血對腦組織的影響明顯高于對照組。同時也提示，生理鹽水的占位效應(yīng)對腦組織的影響早期比較明顯。③免疫組化：實驗性大鼠腦出血血腫周圍組織GFAP的動態(tài)表達(dá)：大鼠ICH后，出血病灶周圍有明顯的免疫反映的陽性細(xì)胞，且在不同時間點陽性細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)表現(xiàn)不同。ICH后6hGFAP表達(dá)最強(qiáng)

5、，陽性細(xì)胞體肥大，突起增粗，陽性細(xì)胞數(shù)量較多(6h為135±10.3682)；ICH后12h和24h，GFAP陽性細(xì)胞數(shù)量(12h為127±4.3012，24h為124.2±5.6303)與6h的比較無明顯的統(tǒng)計學(xué)意義的差別(P＞0.05)；72h后GFAP陽性細(xì)胞數(shù)量為88.2±11.3666，較前明顯減少，與6h，12h和24h組比較都有明顯的差別(P＜0.05)。腦出血后7d，陽性細(xì)胞數(shù)量(115.4±9.7877)，比72h增加

6、(P＜0.05)，但數(shù)量少于6h(P＜0.05)，與12h和24h比較則沒有明顯差別(P＞0.05)。在所有觀測時間點，非出血側(cè)相應(yīng)腦區(qū)僅有微弱的GFAP免疫反映陽性。鹽水組各時間點陽性細(xì)胞數(shù)分別為73±10.72，72.6±11.13，73±8.46，74±11.34，72.2±7.05，72±5.91；P＞0.05。假手術(shù)組各時間點陽性細(xì)胞數(shù)分別為67.2±4.49，67.6±4.16，67.8±6.50，68±5.79，67.8±

7、7.05，68±6.04；P＞0.05。各相應(yīng)時間點出血組陽性細(xì)胞數(shù)與對照組比較，有明顯統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。 研究結(jié)論：大鼠腦出血后腦水腫規(guī)律和行為學(xué)改變一致，提示腦出血后腦水腫是導(dǎo)致病情加重的主要原因之一。腦出血病變部位存在明顯的膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)，其表達(dá)模式與腦水腫的規(guī)律密切相關(guān)，提示星形膠質(zhì)細(xì)胞在腦出血的病理變化過程中有重要作用。出血灶周圍腦組織GFAP表達(dá)水平變化既是細(xì)胞組織損傷的表現(xiàn)，也是病變神經(jīng)組織修復(fù)在分子水平的表