實驗性腦出血腦組織的蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、目的:腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH)是神經(jīng)系統(tǒng)的臨床常見病,主要指原發(fā)性非外傷性腦實質(zhì)內(nèi)出血,占急性腦血管病的20％-30％,病死率和致殘率均較高,嚴重危害人類健康。但是目前尚缺乏ICH的有效治療方法。臨床隨機對照試驗證明,腦血腫的清除并不能很好的改善預后,大約有1/3的ICH患者在發(fā)病后一段時間內(nèi)仍出現(xiàn)進行性神經(jīng)功能惡化,提示除血腫引起的急性神經(jīng)組織損害外,還存在有血腫周邊的繼發(fā)性損害。對這一區(qū)域腦

2、組織的研究必定會更加直觀的揭示ICH后的病理生理過程。
　　 蛋白質(zhì)是基因功能活動的最終執(zhí)行者,是生命現(xiàn)象復雜性和多變性的直接體現(xiàn)者。蛋白質(zhì)組學(Proteomics)是從整體的角度分析細胞、組織、體液等動態(tài)變化的蛋白質(zhì)組成成分、表達水平和修飾狀態(tài),了解蛋白質(zhì)之間的相互作用與聯(lián)系,揭示蛋白質(zhì)功能與細胞生命活動規(guī)律的研究方法。差異蛋白質(zhì)組學則在全貌分析蛋白質(zhì)表達差異的基礎上為探索細胞分子機制提供了可能。
　　 本研究通過對

3、大鼠腦出血模型的制作,對正常腦組織和腦出血72小時后出血灶灶周腦組織進行差異蛋白質(zhì)組學研究,找出有差異變化的蛋白質(zhì),以期探尋腦出血后疾病發(fā)生的病理生理機制,為進一步篩選特異性功能相關蛋白和干預靶位提供線索。
　　 方法:
　　 1.制作大鼠腦出血模型,于72小時處死動物,取病灶側腦組織、正常對照組取相應部位腦組織。2.提取組織總蛋白,利用雙向電泳(2-DE)技術比較大鼠腦出血72小時出血灶周腦組織和正常對照組腦組織蛋白差

4、異表達。第一向等電聚焦電泳、第二向垂直SDS-PAGE電泳后,以硝酸銀或考馬斯亮藍R250染色。投射掃描雙向電泳凝膠,得到圖譜用ImageMaster2D Elite軟件進行圖像分析。對感興趣的蛋白點從凝膠上切下,膠內(nèi)蛋白質(zhì)酶解。應用基質(zhì)輔助激光解析/電離飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(MALDI-TOF/TOF MS)技術結合數(shù)據(jù)庫檢索進行蛋白質(zhì)鑒定分析。
　　 結果:成功制作大鼠腦出血模型,運用蛋白質(zhì)組學技術,比較腦出血72小時與正常腦組

5、織,發(fā)現(xiàn)39種蛋白的表達量發(fā)生了變化,上調(diào)蛋白15種,包括谷氨酰胺合成酶,熱休克同源71kDa蛋白,載脂蛋白E,磷酸丙糖異構酶,二氫嘧啶相關蛋白-2,蛋白酶體亞基α-6型,神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白,mu-晶體球蛋白同源,膜連蛋白A5,抑制素,NADH-Q氧化還原酶75Da亞基,細胞色素b-c1復合體亞基-1等。下調(diào)蛋白24種,包括Transgelin-3,ATP合酶亞基d,吡哆醛激酶,成束蛋白(碎片),天冬氨酸轉氨酶,果糖二磷酸醛縮酶C,α

6、-烯醇化酶,核苷二磷酸激酶A,核苷二磷酸激酶B,銅鋅超氧化物歧化酶,谷胱甘肽硫轉移酶,鳥嘌呤核苷酸連接蛋白亞基α,Cofilin-1,肌酸激酶B型,4-氨基丁轉氨酶,磷酸甘油酸變位酶-1,神經(jīng)絲輕鏈多肽,烏頭酸水合酶,過氧化物酶-2,COP9信號復合體亞基-4等。
　　 結論:
　　 1.獲得了出血灶周腦組織和正常對照腦組織的全蛋白雙向電泳圖譜。
　　 2.鑒定出的腦出血72小時和正常腦組織差異表達蛋白涉及細胞骨