補(bǔ)陽還五湯對小鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血后金屬基質(zhì)蛋白酶遠(yuǎn)期表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的:腦出血(Intracerebral hemorrhage，ICH)是指非外傷性腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的出血。發(fā)病率為60～80/10萬人口/年，在我國占急性腦血管病的30％左右。急性期病死率約為30％～40％，是急性腦血管病中最高的。腦出血的治療主要是對有指征者應(yīng)及時(shí)清除血腫、積極降低顱內(nèi)壓、保護(hù)血腫周圍腦組織。腦出血屬中醫(yī)學(xué)“中風(fēng)”的范疇。清代著名醫(yī)家王清任指出“無氣則不能動(dòng)，不能動(dòng)，名曰半身不遂”，氣為血帥，氣虛則行血無力，血行遲滯則

2、成淤血，氣虛失于統(tǒng)攝，血溢脈外，亦成淤血。因此，氣虛血瘀當(dāng)是腦出血后各種病理生理變化的重要病機(jī)之一。益氣活血法的基礎(chǔ)研究，主要在選用經(jīng)典方—補(bǔ)陽還五湯或仿效其方義自擬方的基礎(chǔ)上開展，且集中于神經(jīng)元保護(hù)和神經(jīng)再生等方面。本實(shí)驗(yàn)采用Ⅶ型膠原酶誘導(dǎo)建立小鼠腦出血模型，通過運(yùn)用益氣活血法代表方劑補(bǔ)陽還五湯干預(yù)，觀察小鼠神經(jīng)行為學(xué)改變，采用免疫組化法檢測vWF（血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志蛋白），計(jì)數(shù)陽性微血管數(shù);采用Western Blot方法檢測金屬基

3、質(zhì)蛋白酶-2(matrixmetalloprotein2，MMP2)、MMP9的蛋白表達(dá)，探討補(bǔ)陽還五湯是否通過調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶活性促進(jìn)血管新生，及腦出血后期應(yīng)用多西環(huán)素抑制血管新生的機(jī)制。
　　 方法:40只8周齡昆明小鼠隨機(jī)分為補(bǔ)陽還五湯組(BU YANGHUAN WU Decoction, BYHWD)，腦出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)組，多西環(huán)素組(Doxcyline，DOX)，補(bǔ)陽還

4、五湯+多西環(huán)素(BYHWD+ DOX)4組，每組10只小鼠，再隨機(jī)抽取5只老鼠用于Western Blot（蛋白質(zhì)印跡）方法，另5只用于免疫組織化學(xué)法。用Ⅶ型膠原酶腦內(nèi)立體定位注入小鼠右側(cè)基底節(jié)內(nèi)復(fù)制小鼠腦出血模型，術(shù)后開始觀察行為學(xué)改變，14天后斷頭取腦，采用免疫組化法檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志蛋白vWF，計(jì)數(shù)陽性新生微血管數(shù)，采用WesternBlot方法檢測MMP2、MMP9的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.免疫組

5、化方法:ICH組陽性微血管數(shù)明顯多于DOX組(P＜0.01);BYHWD組陽性微血管數(shù)明顯多于ICH組（P＜0.01）;BYHWD組陽性微血管數(shù)明顯多于BYHWD+ DOX組（P＜0.01）。
　　 2.Western Blot方法:與ICH組比較，DOX顯著降低MMP9的表達(dá)（P＜0.01），BYHWD能顯著上調(diào)MMP2、9的表達(dá)（P＜0.01）;與BYHWD組比較，DOX能顯著抑制BYHWD對MMP2，9的上調(diào)作用。

6、　　 3.行為學(xué):第1天、第3天兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組小鼠在NIS(Nerve injury score，神經(jīng)損傷評(píng)分)、轉(zhuǎn)角測試、錯(cuò)足測試、體重上無明顯差異。第7天，BYHWD組及BYWHD+DOX組體重明顯重于ICH組及DOX組(P＜0.05)，BYHWD組及BYWHD+DOX組神經(jīng)損傷評(píng)分(NIS)、轉(zhuǎn)角測試、錯(cuò)足測試結(jié)果明顯低于ICH組及DOX組(P＜0.05);第14天，DOX組體重明顯低于ICH組及BYWHD+DOX組（P＜0.0

7、5），BYHWD組體重明顯高于ICH組及BYWHD+DOX組（P＜0.05），DOX組NIS、轉(zhuǎn)角測試、錯(cuò)足測試結(jié)果明顯高于ICH組及BYWHD+DOX組(P＜0.05)，BYHWD組NIS、轉(zhuǎn)角測試、錯(cuò)足測試結(jié)果明顯低于ICH組及BYWHD+DOX組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.金屬基質(zhì)蛋白酶參與腦出血后血管新生的調(diào)節(jié)。
　　 2.補(bǔ)陽還五湯可能通過改變金屬基質(zhì)蛋白酶的表達(dá)，促進(jìn)腦出血后的血管新生