食管癌細(xì)胞中米勃龍—雄激素受體—雌激素受體β信號(hào)通路.pdf

1、背景與目的：
　　食管癌是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其中食管鱗癌(Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）與食管腺癌(Esophageal adenocarcinoma，EA)是食管癌最常見(jiàn)的兩種組織學(xué)類(lèi)型。在已發(fā)現(xiàn)的食管癌中存在明顯的性別差異,相同生存環(huán)境中男性發(fā)病率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于女性患者，男女患病比例為3-9:1，且男性患者、絕經(jīng)后女性患者死亡率高于絕經(jīng)前女性患者。以往研究結(jié)果也顯示食管癌

2、組織中雌激素受體（estrogen receptor，ER）和雄激素受體（androgen receptor，AR）含量與患者性別、腫瘤分化程度、浸潤(rùn)程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。而帶有性激素受體的食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)受循環(huán)中性激素水平的影響。
　　為進(jìn)一步探究性激素與性激素受體在食管癌發(fā)病中的作用與影響，本研究采用雄激素類(lèi)似物以及雄激素受體抑制劑處理食管癌細(xì)胞系，然后檢測(cè)ERβ表達(dá)的變化以及細(xì)胞增殖等生物學(xué)性狀的改變，并通過(guò)染色質(zhì)免疫共沉

3、淀分析探討其作用機(jī)制。
　　材料與方法：
　　1.Western-blot檢測(cè)食管癌細(xì)胞系EC109、EC9706、TE3、Kyse510中AR表達(dá)情況。
　　2.雄激素類(lèi)似物米勃龍（Mibolerone，MIB）分別處理食管癌細(xì)胞EC109、EC9706細(xì)胞24h、48h，qRT-PCR、Western blot檢測(cè)MIB作用后ERβ在RNA水平和蛋白水平的表達(dá)變化。
　　3.MIB以及雄激素受體抑制劑羥基氟他

4、氨(Hydroxy flutamide,OH-FI)分別處理食管癌細(xì)胞EC109、EC9706細(xì)胞48h。qRT-PCR、Western blot檢測(cè)藥物作用后EC109、EC9706中ERβ在RNA水平和蛋白水平的表達(dá)變化。
　　4.染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP)檢測(cè)食管癌細(xì)胞系EC9706中AR與ERβ啟動(dòng)子是否相互結(jié)合。
　　5.通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)M

5、IB對(duì)食管癌細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果：
　　1.Western blot結(jié)果顯示食管癌細(xì)胞系EC109與EC9706中有雄激素受體的表達(dá)，而食管癌細(xì)胞系Kyse510與TE3未檢測(cè)到雄激素受體，因而我們?cè)诤罄m(xù)的研究中選擇食管癌細(xì)胞系EC109與EC9706作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
　　2.MIB作用48小時(shí)使食管癌細(xì)胞ERβ在mRNA、蛋白水平表達(dá)上調(diào)，而雄激素受體抑制劑羥基氟他氨可以逆轉(zhuǎn)由MIB對(duì)ERβ表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。

6、>　　3.ChIP結(jié)果顯示在雄激素存在時(shí)，AR結(jié)合在ERβ啟動(dòng)子區(qū)域。
　　4.細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果示EC9706、EC109用10nM MIB處理48h之后，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)EC9706、EC109較對(duì)照組增殖活躍。
　　結(jié)論：
　　1.AR在食管癌細(xì)胞系EC109與EC9706中表達(dá)，而在Kyse510與TE3無(wú)表達(dá)。
　　2.雄激素類(lèi)似物以及雄激素受體抑制劑藥物實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示食管癌細(xì)胞系EC109、EC9706中