不同劑量L-NAME誘導(dǎo)先天性肥厚性幽門狹窄大鼠動(dòng)物模型的系列研究.pdf

1、第一部分
　　目的：本研究旨在利用一氧化氮合酶（NOS）抑制劑L-NAME經(jīng)灌胃方式建立先天性肥厚性幽門狹窄（CHPS）動(dòng)物模型，比較不同劑量L-NAME對(duì)CHPS新生鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響及幽門肌厚度的差異。
　　方法：將受孕后的8只SD大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（A組、B組、C組）及對(duì)照組，以新生鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。自孕期第13天始至新生鼠生后第21天，A組、B組、C組孕鼠經(jīng)灌胃方式分別給予不同劑量的L-NAME（分別為60mg/kg/d、

2、300mg/kg/d、600mg/kg/d），對(duì)照組經(jīng)相同途徑給予同等劑量的生理鹽水。新生鼠生后第1天、7天、14天、21天分別稱重，生后第21天麻醉處死，留取幽門組織，HE染色后顯微鏡下測(cè)量幽門環(huán)肌層的厚度。
　　結(jié)果：（1）母鼠孕期在22～24天。用藥期間各組孕鼠均無死亡、早產(chǎn)或流產(chǎn)等不良反應(yīng)。
　　（2）對(duì)照組、A組、B組、C組分別產(chǎn)新生鼠24只、21只、22只、21只。從出生至生后第21天，全部新生鼠存活。對(duì)照組新生

3、鼠未發(fā)現(xiàn)肢體發(fā)育異常情況。A組新生鼠：右后肢缺如畸形有6只、雙后肢缺如畸形有2只；B組新生鼠：右后肢缺如畸形有6只、雙后肢缺如畸形有1只；C組新生鼠：雙前肢缺如畸形有7只、四條肢體缺如畸形有4只；A組、B組、C組新生鼠肢體缺如畸形率分別為11.9％、9.1%、35.7%。新生鼠畸形率實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組(p值均為0.000,p<0.001)；A組與B組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.36,p>0.05）；C組高于A組、B組，差異均有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義(χ2=40.38,p=0.000;χ2=61.14,p=0.000,p<0.001)。
　?。?）實(shí)驗(yàn)期間各組新生鼠均未發(fā)現(xiàn)嘔吐癥狀情況。從新生鼠出生到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，對(duì)照組、A組均未出現(xiàn)腹脹現(xiàn)象。在生后第7～14天B組新生鼠出現(xiàn)輕度腹脹，C組腹脹更明顯。但在生后第14～21天，B組、C組新生鼠的腹脹癥狀逐漸減輕，到實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死時(shí)，新生鼠腹脹癥狀不明顯。
　?。?）A組、B組、C組新生鼠出生體重低于對(duì)照組，體重差異有統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)意義（p值均為0.000，p<0.001）,而A組、B組、C組各組出生體重之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.872，p=0.927，p=0.937，p>0.05）；A組、B組、C組新生鼠生后第7天、14天及21天的體重增長(zhǎng)速率均明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p值均為0.000，p<0.001）。
　　（5）與對(duì)照組新生鼠相比，A組、B組、C組第21日齡新生鼠幽門肌明顯增生、肥厚，尤以環(huán)形肌為主，環(huán)形肌纖維排列紊亂。第21日齡

6、新生鼠對(duì)照組、A組、B組、C組幽門環(huán)肌的平均厚度(??±S)分別為0.24±0.07,0.30±0.11,0.34±0.11,0.41±0.11(單位：mm)，p值均為0.000，p<0.001，幽門環(huán)肌厚度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A組、B組、C組各組之間幽門肌厚度的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p值均為0.000，p<0.001）。
　　結(jié)論：（1）經(jīng)灌胃給予不同劑量L-NAME均可誘導(dǎo)新生SD大鼠出現(xiàn)幽門肥厚梗阻。（2）在L-NAME誘導(dǎo)S

7、D大鼠CHPS動(dòng)物模型方面，600mg/kg劑量可能優(yōu)于小劑量60mg/kg。
　　第二部分
　　目的：研究神經(jīng)元型一氧化氮合酶（nNOS）、c-Met蛋白在CHPS大鼠幽門的表達(dá)情況，探討nNOS、c-Met蛋白在CHPS起病中的影響作用。
　　方法：將受孕后的SD大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（A組、B組、C組）及對(duì)照組，以新生鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。自孕期第13天始至新生鼠生后第21天，A組、B組、C組母鼠經(jīng)灌胃方式分別給予不同劑量的

8、NOS抑制劑L-NAME(分別為60mg/kg/d、300mg/kg/d、600mg/kg/d)，建立CHPS動(dòng)物模型，對(duì)照組經(jīng)相同途徑給予等量的生理鹽水。新生鼠生后21天，腹腔注射麻醉，留取幽門組織作石蠟切片。免疫組化后運(yùn)用圖像分析技術(shù)分別測(cè)定nNOS、c-Met蛋白表達(dá)的陽性面積（Area）、平均光密度（MD）和積分光密度（IOD）三項(xiàng)指標(biāo)作半定量分析。
　　結(jié)果：（1）nNOS主要表達(dá)于幽門環(huán)肌和縱肌間的腸肌神經(jīng)叢細(xì)胞胞漿內(nèi)

9、，實(shí)驗(yàn)組中nNOS染色陽性神經(jīng)纖維表達(dá)的Area和IOD及MD均較對(duì)照組減少,差異具有顯著性（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。
　?。?）c-Met蛋白主要表達(dá)于幽門粘膜層上皮細(xì)胞的胞漿及胞核，實(shí)驗(yàn)組中c-Met蛋白表達(dá)的Area和IOD及MD均較對(duì)照組增加,差異具有顯著性（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。
　　結(jié)論：（1）L-NAME可能抑制胎鼠和新生鼠幽門區(qū)腸肌神經(jīng)叢細(xì)胞內(nèi)nNOS的活性或表達(dá)，導(dǎo)