二甲雙胍增加食管鱗癌對(duì)順鉑化療敏感性的機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　二甲雙胍(Metformin、Met)作為臨床常用的一線降血糖藥物，不良反應(yīng)小，安全性好，對(duì)正常人無(wú)明顯降血糖作用。最近大量研究發(fā)現(xiàn)二甲雙胍可以抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，也有研究發(fā)現(xiàn)二甲雙胍可以增加一些放化療藥物的敏感性，其抗腫瘤機(jī)制大多是通過(guò)激活與腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphateactivated protein kinase、AMPK)相關(guān)的信號(hào)通路，從而抑制蛋自質(zhì)的翻譯和誘導(dǎo)細(xì)胞的

2、凋亡。而二甲雙胍在抗食管癌方面鮮少研究。
　　目的：
　　探討二甲雙胍對(duì)食管鱗癌EC-109細(xì)胞的增殖抑制作用及對(duì)聯(lián)合順鉑(DDP、cisplatin)化療的增敏作用，并初步探討其分子機(jī)制，為二甲雙胍聯(lián)合順鉑治療食管癌提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.食管鱗癌EC-109細(xì)胞分為四組:空白對(duì)照組(A)、Met組(B)、DDP組(C)、Met+DDP組(D)，其中B組設(shè)有5個(gè)濃度組(B-a5mmol/L、B-b1

3、0mmol/L、B-c20 mmol/L、 B-d40 mmol/L B-e80 mmol/L)，C組設(shè)有2個(gè)濃度組(C-a4.17μmol/L、C-b8.33μmol/L)，D組Met濃度均為5mmol/L（聯(lián)合a組、聯(lián)合b組）。
　　2.四甲基偶氮唑藍(lán)法(MTT)測(cè)定不同時(shí)間段(24h、48 h、72 h)的細(xì)胞增殖抑制率，并計(jì)算二甲雙胍作用的IC50值，選用5mmol/L的二甲雙胍濃度作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的濃度。
　　3.流式

4、細(xì)胞儀檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組作用48 h后對(duì)細(xì)胞周期的影響。
　　4.Real Time-PCR法測(cè)定各組細(xì)胞作用48 h后的p21和JNK1的RNA表達(dá)情況;Western Blot法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞作用48 h后的p21和JNK1的蛋白表達(dá)情況。（其中第3、4步實(shí)驗(yàn)中的分組為:A組、B-a組、B-c組、C-a組、聯(lián)合a組，分別另命名為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組）
　　結(jié)果：
　　1.MTT結(jié)果顯示:B組，在同一時(shí)間點(diǎn)，不同濃度的二

5、甲雙胍對(duì)細(xì)胞的增殖抑制率均顯著高于空白對(duì)照組(P＜0.05)，且呈濃度依賴(lài)性(P＜0.05);在二甲雙胍各濃度組內(nèi)，作用48 h、72 h后的細(xì)胞增殖抑制率均高于作用24 h后(P＜0.05)，作用72 h后的細(xì)胞增殖抑制率均高于作用24 h、48 h后(P＜0.05)。聯(lián)合a組和聯(lián)合b組作用24 h、48 h、72 h后對(duì)細(xì)胞的增殖抑制率均高于同時(shí)間段5mmol/L·Met組和單藥順鉑組(P＜0.05);同一時(shí)間點(diǎn)聯(lián)合a組與聯(lián)合b組比

6、較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，結(jié)果顯示二甲雙胍聯(lián)合或不聯(lián)合順鉑可誘導(dǎo)EC-109細(xì)胞周期阻滯在G1、S期，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.Real Time-PCR結(jié)果顯示:以GAPDH為內(nèi)參，與Ⅰ組比較，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組的p21基因表達(dá)明顯上調(diào)，且Ⅴ組的p21基因表達(dá)上調(diào)較Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組明顯(P＜0.05);與Ⅰ組比較，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組JNK1基因表達(dá)上調(diào)，但Ⅴ組的J

7、NK1蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.05)。
　　4.Western Blot結(jié)果顯示:與Ⅰ組比較，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組的p21蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，且Ⅴ組的p21蛋白表達(dá)上調(diào)較Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組明顯(P＜0.05);與Ⅰ組比較，Ⅱ、Ⅳ組JNK1蛋白表達(dá)上調(diào)，但Ⅲ、Ⅴ組的JNK1蛋白表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　二甲雙胍對(duì)食管鱗癌EC-109細(xì)胞的增殖具有抑制作用，且呈時(shí)間濃度依賴(lài)性;二甲雙胍可以增加EC-109細(xì)胞對(duì)順鉑