二甲雙胍增加食管鱗癌對順鉑化療敏感性的機制研究.pdf

1、背景：
　　二甲雙胍(Metformin、Met)作為臨床常用的一線降血糖藥物，不良反應小，安全性好，對正常人無明顯降血糖作用。最近大量研究發(fā)現二甲雙胍可以抑制多種腫瘤細胞的生長，也有研究發(fā)現二甲雙胍可以增加一些放化療藥物的敏感性，其抗腫瘤機制大多是通過激活與腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphateactivated protein kinase、AMPK)相關的信號通路，從而抑制蛋自質的翻譯和誘導細胞的

2、凋亡。而二甲雙胍在抗食管癌方面鮮少研究。
　　目的：
　　探討二甲雙胍對食管鱗癌EC-109細胞的增殖抑制作用及對聯(lián)合順鉑(DDP、cisplatin)化療的增敏作用，并初步探討其分子機制，為二甲雙胍聯(lián)合順鉑治療食管癌提供理論依據。
　　方法：
　　1.食管鱗癌EC-109細胞分為四組:空白對照組(A)、Met組(B)、DDP組(C)、Met+DDP組(D)，其中B組設有5個濃度組(B-a5mmol/L、B-b1

3、0mmol/L、B-c20 mmol/L、 B-d40 mmol/L B-e80 mmol/L)，C組設有2個濃度組(C-a4.17μmol/L、C-b8.33μmol/L)，D組Met濃度均為5mmol/L（聯(lián)合a組、聯(lián)合b組）。
　　2.四甲基偶氮唑藍法(MTT)測定不同時間段(24h、48 h、72 h)的細胞增殖抑制率，并計算二甲雙胍作用的IC50值，選用5mmol/L的二甲雙胍濃度作為后續(xù)實驗的濃度。
　　3.流式

4、細胞儀檢測各實驗組作用48 h后對細胞周期的影響。
　　4.Real Time-PCR法測定各組細胞作用48 h后的p21和JNK1的RNA表達情況;Western Blot法檢測各實驗組細胞作用48 h后的p21和JNK1的蛋白表達情況。（其中第3、4步實驗中的分組為:A組、B-a組、B-c組、C-a組、聯(lián)合a組，分別另命名為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組）
　　結果：
　　1.MTT結果顯示:B組，在同一時間點，不同濃度的二

5、甲雙胍對細胞的增殖抑制率均顯著高于空白對照組(P＜0.05)，且呈濃度依賴性(P＜0.05);在二甲雙胍各濃度組內，作用48 h、72 h后的細胞增殖抑制率均高于作用24 h后(P＜0.05)，作用72 h后的細胞增殖抑制率均高于作用24 h、48 h后(P＜0.05)。聯(lián)合a組和聯(lián)合b組作用24 h、48 h、72 h后對細胞的增殖抑制率均高于同時間段5mmol/L·Met組和單藥順鉑組(P＜0.05);同一時間點聯(lián)合a組與聯(lián)合b組比

6、較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　2.流式細胞儀檢測細胞周期，結果顯示二甲雙胍聯(lián)合或不聯(lián)合順鉑可誘導EC-109細胞周期阻滯在G1、S期，與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.Real Time-PCR結果顯示:以GAPDH為內參，與Ⅰ組比較，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組的p21基因表達明顯上調，且Ⅴ組的p21基因表達上調較Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組明顯(P＜0.05);與Ⅰ組比較，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組JNK1基因表達上調，但Ⅴ組的J

7、NK1蛋白表達明顯下調(P＜0.05)。
　　4.Western Blot結果顯示:與Ⅰ組比較，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組的p21蛋白表達明顯上調，且Ⅴ組的p21蛋白表達上調較Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組明顯(P＜0.05);與Ⅰ組比較，Ⅱ、Ⅳ組JNK1蛋白表達上調，但Ⅲ、Ⅴ組的JNK1蛋白表達下調(P＜0.05)。
　　結論：
　　二甲雙胍對食管鱗癌EC-109細胞的增殖具有抑制作用，且呈時間濃度依賴性;二甲雙胍可以增加EC-109細胞對順鉑