伊馬替尼治療中miRNA及其靶基因在慢?；颊咧械谋磉_(dá)分析.pdf

1、慢性粒細(xì)胞白血病(CML)，簡稱慢粒，是一種惡性克隆增殖性造血系統(tǒng)疾病，起源于骨髓多能造血干細(xì)胞。95％的慢?；颊咴谶z傳學(xué)上具有Ph染色體，是9號染色體上的ABL基因與22號染色體上的BCR基因相互融合，最后形成bcr-abl融合基因，其編碼的P210融合蛋白參與形成了慢粒特征性的分子生物學(xué)標(biāo)志。因為P210蛋白具有失調(diào)的酪氨酸激酶活性，故bcr-abl融合基因可以導(dǎo)致白血病的發(fā)生。最后造成造血細(xì)胞出現(xiàn)過度增殖，對骨髓基質(zhì)的粘附性較前下

2、降和凋亡喪失等生物學(xué)特性的改變。BCR-ABL融合蛋白同時能激活多條與細(xì)胞增殖有關(guān)的信號通路，能改變DNA損傷修復(fù)途徑，最后引起致命性的血液系統(tǒng)腫瘤。因此，目前慢粒的各種治療方法都是圍繞著bcr-abl基因和其編碼的融合蛋白。
　　CML治療的顯著性進(jìn)展為酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼的臨床應(yīng)用，在慢性期患者中療效顯著，在加速期和急變期的患者中同樣能夠明顯延長患者的生存時間，是目前治療慢性粒細(xì)胞白血病的主要藥物之一，美國國家癌癥綜合網(wǎng)絡(luò)

3、(NCCN)首推伊馬替尼作為治療慢粒的藥物。從2000年開始我國在臨床上應(yīng)用伊馬替尼進(jìn)行治療CML，最近幾年的臨床觀察結(jié)果顯示，常規(guī)劑量伊馬替尼(300~400 mg/d)對大部分慢性期Ph+CML患者可以取得滿意的療效。然而隨著伊馬替尼的臨床應(yīng)用，逐漸出現(xiàn)了耐藥現(xiàn)象，且在慢性粒細(xì)胞白血病加速期(AP)或急變期(Bc)的患者中更為多見。近幾年來關(guān)于伊馬替尼耐藥機(jī)制的研究很多，但普遍認(rèn)為導(dǎo)致伊馬替尼耐藥的機(jī)制主要有：bcr-abl基因突變

4、和擴(kuò)增，繼發(fā)其他核型改變，如del(7q)、de1(20q)、tri8、mono7等?，F(xiàn)多項研究表明microRNA(miRNA)可以作為腫瘤抑制基因和(或)癌基因，miRNA的異常表達(dá)通過促進(jìn)癌細(xì)胞克隆的自我更新而引發(fā)一系列的耐藥。
　　miRNA是一類非編碼的微小RNA分子，它的生成主要經(jīng)歷了原始轉(zhuǎn)錄本、前體和成熟體，最終的成熟體為19到24個堿基(nt)大小，能夠通過與靶mRNA3’非編碼區(qū)(UTR)特異性結(jié)合，在翻譯和轉(zhuǎn)錄

5、后水平調(diào)控靶基因的表達(dá)，與生物細(xì)胞的發(fā)展、分化、凋亡和增殖關(guān)系密切。
　　所以本課題旨在利用Real-time quantitative PCR(RT-PCR)技術(shù)從細(xì)胞水平檢測慢粒慢性期與病情進(jìn)展的患者骨髓單個核細(xì)胞中miRNA分子的表達(dá)有無差異，具體篩選的miRNA分子分別為microRNA-21(miR-21)、miR-10a、miR-31、miR-34a、miR-155，如果表達(dá)確有明顯差異，我們進(jìn)一步觀察上述miRNA及

6、其靶基因在CML敏感組與耐藥組患者骨髓單個核細(xì)胞中的表達(dá)差異情況。為慢粒耐藥患者提供新的治療靶點。
　　實驗一
　　目的：探討慢性期和進(jìn)展期慢?；颊適iRNA的表達(dá)水平
　　方法:收集CML慢性期患者和病情進(jìn)展患者的骨髓標(biāo)本共35例。制備骨髓單個核細(xì)胞并抽提總RNA，利用紫外分光光度儀檢測RNA提取液的濃度和純度，最后利用RT-PCR技術(shù)檢測miR-21、miR-10a、miR-31、miR-34a、miR-155在慢

7、性期和進(jìn)展期慢粒患者中的相對表達(dá)水平。
　　結(jié)果：CML患者服用伊馬替尼后進(jìn)展組的骨髓單個核細(xì)胞中miR-21的表達(dá)明顯高于慢性期組，miR-10a、miR-31、miR-34a、miR-155在兩組患者骨髓單個核細(xì)胞中的表達(dá)水平并無顯著差異，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：miR-21的高表達(dá)可能與慢性粒細(xì)胞白血病患者服用伊馬替尼期間出現(xiàn)病情進(jìn)展有關(guān)。
　　實驗二
　　目的：探討伊馬替尼治療敏感組和耐

8、藥組患者miR-21的表達(dá)水平
　　方法:收集伊馬替尼治療敏感和耐藥的慢?；颊吖撬铇?biāo)本共37例。制備骨髓單個核細(xì)胞并抽提總RNA，利用紫外分光光度儀檢測RNA提取液的濃度和純度，最后利用RT-PCR技術(shù)檢測miR-21在敏感組和耐藥組患者中的相對表達(dá)水平。
　　結(jié)果：CML耐藥組患者骨髓單個核細(xì)胞中miR-21的表達(dá)明顯高于敏感組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0001)。
　　結(jié)論：miR-21可能與CML患者口服伊馬替

9、尼后出現(xiàn)耐藥存在密切關(guān)系。
　　實驗三
　　目的：探討miR-21的靶基因在伊馬替尼治療敏感組和耐藥組患者中的表達(dá)水平。
　　方法：收集伊馬替尼治療敏感和耐藥的慢粒患者骨髓標(biāo)本共37例。制備骨髓單個核細(xì)胞并抽提總RNA，利用紫外分光光度儀檢測RNA提取液的濃度和純度，制備cDNA，最后利用RT-PCR技術(shù)檢測PDCD4、PTEN在敏感組和耐藥組患者中的相對表達(dá)水平。
　　結(jié)果：CML耐藥組患者骨髓單個核細(xì)胞中PD