健脾補腎活血法對糖尿病大鼠腎組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)表達的影響.pdf

1、目的：糖尿病腎?。―N）作為糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥之一，能夠引發(fā)終末期腎?。‥SRD），對糖尿病患者的健康造成嚴重危害，是糖尿病患者死亡的主要原因。因此，積極有效地防治糖尿病腎病意義重大。導師張庚良教授根據(jù)健脾補腎活血法進行組方，在保護腎臟及延緩其病程進展方面取得顯著的效果。本實驗通過腹腔注射鏈脲佐菌素誘導建立糖尿病大鼠模型，后予以藥物干預，觀察健脾補腎活血法對糖尿病大鼠的一般情況、血生化各指標、腎組織病理形態(tài)學、腎臟肥大指數(shù)、24

2、h尿白蛋白排泄率及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）表達的影響，探討本方在糖尿病腎病腎臟保護方面的作用機制。
　　方法：選用清潔級健康雄性SD大鼠，體重約230~250g，共58只，普通飼料適應性喂養(yǎng)1周，隨機分為正常對照組（N組）10只，另外48只大鼠用于復制建立糖尿病模型。按55mg/kg體重計算，予以1％的鏈脲佐菌素枸櫞酸緩沖液（緩沖液濃度為0.1mmol/L，pH值為4.5）左下腹腔內(nèi)一次性

3、注射，N組予以等量的1%檸檬酸緩沖液左下腹腔內(nèi)一次性注射。72小時后于大鼠尾尖取血，若血糖值≥16.7mmol/L，并且大鼠飲水量及排尿量均明顯增多，則表明造模成功。
　　將成模的大鼠隨機分為模型對照組（M組）、健脾補腎活血法組（H組）、厄貝沙坦組（W組）、健脾補腎活血法聯(lián)合厄貝沙坦組（H+W組），每組為12只。造模成功1周后，按照成人劑量的10倍對H組、W組及H+W組予以灌胃給藥。H組予本方每日10ml/kg（相當于生藥35.3

4、g/kg）體重灌胃，W組予厄貝沙坦片混懸液（阿拉伯樹膠制為混懸液）每日10ml/kg（相當于原藥2.5mg/ml）體重灌胃，H+W組每日上午予與H組同等劑量的健脾補腎活血中藥，每日下午予與W組同等劑量的厄貝沙坦，N組和M組每日給予同等體積的生理鹽水灌胃。連續(xù)灌胃8周。第8周末，用代謝籠收集24h尿液并記錄尿量，測定24h尿白蛋白排泄率（UAER），禁食不禁水12小時，按20mg/kg體重計算，予2%戊巴比妥鈉腹腔注射進行麻醉，取大鼠左側(cè)

5、股動脈血，用于測大鼠血葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐及腫瘤壞死因子-α和單核細胞趨化蛋白-1，迅速取出雙腎制作標本，光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)學變化，并測定腎臟肥大指數(shù)，免疫組化法測定腫瘤壞死因子-α和單核細胞趨化蛋白-1在腎組織的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況觀察:N組的大鼠體重增加，一般狀態(tài)良好，毛皮有光澤，反應敏捷，動作自如，進食及飲水正常，排便排尿正常。M組的大鼠消瘦，精神萎靡，毛色雜亂枯黃，活動度

6、和靈敏度下降，多飲，多食，多尿，大便不成形。隨實驗進行過程中，個別大鼠出現(xiàn)糖尿病并發(fā)癥如足部潰爛、四肢水腫。經(jīng)藥物治療后，與M組比較，三個治療組大鼠的臨床表現(xiàn)均有不同程度改善。實驗期間，N組大鼠由于互相撕咬致皮膚潰爛感染死亡1只；M組大鼠死亡1只，考慮為行動遲緩、進食差所致；W組因灌胃操作失誤引起窒息死亡1只。
　　2.血糖及血脂的變化:與N組相比，M組、H組、W組、H+W組大鼠血糖、血脂均明顯升高，有顯著性差異；與M組相比，H組

7、和H+W組大鼠血糖、血脂水平顯著降低，有統(tǒng)計學差異；與M組相比，W組大鼠血糖、血脂下降不明顯，無統(tǒng)計學差異。
　　3.腎臟肥大指數(shù)及24小時尿白蛋白排泄率的變化:與N組相比，M組與三個治療組大鼠的腎臟肥大指數(shù)及24h尿白蛋白排泄率均明顯升高，有統(tǒng)計學差異；與M組相比，三個治療組大鼠的腎臟肥大指數(shù)及24h尿白蛋白排泄率均有所降低，有顯著性差異；H+W組大鼠的腎臟肥大指數(shù)及24h尿白蛋白排泄率均低于H組和W組，有顯著性差異。
　

8、　4.腎功能的變化:與N組相比，M組和三個治療組大鼠的尿素氮、肌酐均升高，有顯著性差異；三個治療組與M組相比，均可使尿素氮、肌酐降低，有顯著性差異；與H組及W組比較，H+W組大鼠的尿素氮、肌酐水平降低明顯，有顯著性差異。
　　5.腎臟組織病理形態(tài)學的變化:N組腎單位清晰完整，未見增大的腎小球，無腎小球基底膜增厚及系膜細胞增生，無炎性細胞浸潤；M組腎小球體積明顯增大，基底膜增厚，系膜區(qū)增寬，部分腎小管上皮細胞顯示空泡狀或顆粒狀變性，

9、可見炎性細胞浸潤。與M組相比，H組、W組及H+W組大鼠腎臟病理損傷均有不同程度的減輕，以H+W組最明顯。
　　6.腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）表達的影響:TNF-α和MCP-1抗原免疫組化顯示為棕黃色顆粒狀陽性反應物，主要存在于腎組織腎小管上皮細胞和腎間質(zhì)細胞胞漿內(nèi)。N組大鼠TNF-α和MCP-1沒有表達或呈弱陽性表達。M組大鼠TNF-α和MCP-1顯示強陽性表達，主要集中在腎小管上皮細胞內(nèi)，

10、與N組相比較有顯著性差異。與M組相比，三個治療組大鼠TNF-α和MCP-1均有較低的表達，有顯著性差異，其中以H+W組最為明顯。用ELISA法檢測血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）。與N組相比，M組及三個治療組大鼠的TNF-α和MCP-1均升高，有顯著性差異；與M組相比，H組、W組、H+W組大鼠的TNF-α和MCP-1均較低，有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；與H組及W組比較，H+W組大鼠的TNF-α和M