磷脂微乳電動(dòng)色譜系統(tǒng)的構(gòu)建及其在預(yù)測(cè)藥物血腦屏障通透性中的應(yīng)用.pdf

1、微乳電動(dòng)色譜（MEEKC）是使用微乳作為分離介質(zhì)的電動(dòng)色譜技術(shù)，因其具有高效的分離效率、廣泛的適用范圍和極少的樣品消耗量等優(yōu)勢(shì)，自有研究報(bào)道以來一直很受關(guān)注，特別適合于復(fù)雜混合物的分析。作為MEEKC分離介質(zhì)的微乳液是一種納米級(jí)的液滴分散在另一種不相混溶的液體中形成的熱力學(xué)穩(wěn)定體系。因?yàn)槲⑷橐旱尉哂袃?nèi)部疏水、外側(cè)親水和各向異性的類生物膜結(jié)構(gòu)，理論上 MEEKC也可像其他生物分配色譜（BPC）一樣，如磷脂膜色譜（IAM）、膠束液相或電動(dòng)色

2、譜（MLC，MELC）和脂質(zhì)體電動(dòng)色譜（LEKC）等，用于模擬化合物在生物膜上的被動(dòng)擴(kuò)散過程。但是由于經(jīng)典的MEEKC常以十二烷基硫酸鈉（SDS）為表面活性劑，其微乳構(gòu)成與生物膜成分存在明顯差異，MEEKC應(yīng)用于模擬生物膜研究的報(bào)道尚為少見。本研究以含有生物類表面活性劑磷脂和膽酸鈉（SC）的微乳作為電動(dòng)色譜中的分離介質(zhì)，通過對(duì)不同結(jié)構(gòu)化合物集合的定量結(jié)構(gòu)-保留（QSRR）關(guān)系研究，分析新型磷脂MEEKC體系中的溶質(zhì)保留機(jī)制，并選擇一個(gè)較

3、好的MEEKC體系用于藥物穩(wěn)態(tài)腦/血漿濃度比值（log BB）的預(yù)測(cè)。
　　目的：以大豆磷脂為主要表面活性劑制備適合毛細(xì)管電動(dòng)色譜使用的的微乳體系，應(yīng)用溶劑化參數(shù)模型研究化合物的定量結(jié)構(gòu)保留關(guān)系，闡述化合物與微乳擬生物膜間的分子間作用機(jī)制，并考察磷脂微乳電動(dòng)色譜體系作為藥物血腦屏障通透性體外預(yù)測(cè)工具的實(shí)際價(jià)值。
　　方法：以大豆磷脂、SDS、膽酸鈉或全氟辛基磺酸鉀等為表面活性劑，以正丁醇為助表面活性劑，庚烷、辛醇或肉豆蔻酸異

4、丙酯（IPM）作為油相，磷酸鹽溶液為水相，制備適合于毛細(xì)管電泳使用的微乳體系。通過測(cè)定微乳的粒徑和 Zeta電位變化考察微乳結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，通過測(cè)定苯甲酰胺、鄰甲苯胺和2-萘酚保留因子的重復(fù)性考察待測(cè) MEEKC體系的穩(wěn)定性。使用動(dòng)態(tài)涂層毛細(xì)管，以二甲基亞砜和十二烷基苯分別做為電滲流和微乳液滴的遷移標(biāo)記物，測(cè)定26個(gè)具有不同結(jié)構(gòu)的小分子中性化合物在微乳電動(dòng)色譜體系下的保留因子，建立線性溶劑化能量關(guān)系（LSER）方程，并分析各分子間作用力在

5、溶質(zhì)分配到微乳液滴過程中的貢獻(xiàn)。利用LSER方程系數(shù)，采用矢量距離法比較各MEEKC體系間或與其他生物分配過程的類似性。應(yīng)用所建的微乳體系ME5，在pH7.4條件下測(cè)定了34種藥物的保留因子，并結(jié)合其他分子結(jié)構(gòu)參數(shù)建立藥物log BB值的預(yù)測(cè)模型。
　　結(jié)果：共制備了18種微乳體系，在只改變油相而其他組成不變的情況下，微乳的粒徑和Zeta電位沒有明顯差異，且在30 d內(nèi)無明顯變化。建立了26個(gè)小分子化合物在18種微乳體系下的LSE

6、R方程，各方程都是系數(shù)v和b的絕對(duì)值較大，且均是前者為正后者為負(fù)。油相種類及濃度對(duì)LSER方程系數(shù)無明顯影響。選擇ME5體系（2.00％SP-3.50%SC-6.0%丁醇-0.7%辛醇-87.80%20 mmol·L-1磷酸二氫鈉磷酸鹽緩沖液，pH7.4）模擬藥物的透血腦屏障過程，34種藥物的log k值與log BB值之間沒有顯著的線性相關(guān)性（log BB=0.7192 log k-0.2713，R2=0.487，n=34)。引入分子

7、量（MW）、分子體積（MV）、分子極性表面積（PSA）、氫鍵受體數(shù)目（HBA）、自由旋轉(zhuǎn)鍵個(gè)數(shù)（FRB）、氫鍵供體數(shù)目（HBD）六個(gè)理化參數(shù)后，所建立的多元回歸方程的相關(guān)性得到顯著提高：log BB=0.468+0.411 log k-0.219 PSA/10+0.488 MW/100+0.088 HBA-0.007 HBD+0.050 FRB-0.579 MV/100（R2=0.742，n=34）。
　　結(jié)論：
　　1.磷

8、脂類微乳電動(dòng)色譜體系下的溶質(zhì)保留特征與其他微乳電動(dòng)色譜體系特征基本相似，即溶質(zhì)的體積和氫鍵堿度對(duì)其在微乳中的保留影響較大，溶質(zhì)體積增加利于保留，氫鍵堿性增加減弱保留。各體系LSER方程系數(shù)間的矢量距離也非常接近，說明表面活性劑類型和油相組成對(duì)中性溶質(zhì)在微乳體系中的保留選擇性均無明顯影響。
　　2.應(yīng)用本研究篩選的磷脂微乳體系所測(cè)定的藥物log k值尚不能直接用于藥物log BB值的預(yù)測(cè)，只有結(jié)合其他分子結(jié)構(gòu)參數(shù)進(jìn)行多元回歸才能建立