納米氧化鋁對血腦屏障模型通透性影響及機(jī)制的體外研究.pdf

1、目的：通過建立體外血腦屏障模型，評價(jià)納米氧化鋁對血腦屏障通透性的影響，初步探討血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)納米氧化鋁的方式。
　　 方法：
　　 1.觀察納米氧化鋁顆粒（50 nm）在溶液中的分散情況:
　　 (1)采用Nano-ZS90納米粒度/ZETA電位測定儀測定納米氧化鋁顆粒懸液的zeta電位及粒徑。
　　 (2)采用電鏡觀察納米氧化鋁形態(tài)及尺寸。
　　 2.建立體外血腦屏障模型:
　　 (1)原

2、代培養(yǎng)大乳鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞、星型膠質(zhì)細(xì)胞及免疫組化檢測純度。
　　 (2)共培養(yǎng)與血腦屏障模型有效性的鑒定。
　　 3.納米氧化鋁對血腦屏障通透性的影響:
　　 (1)以0.0125 mg/ml、0.025 mg/ml、0.05 mg/ml的納米氧化鋁對血腦屏障模型進(jìn)行染毒，比較染毒前后血腦屏障模型對蘆丁通透性變化。
　　 (2)以0.05 mg/ml納米氧化鋁對血腦屏障模型進(jìn)行染毒，分別比較0、2、4

3、、6、8h不同染毒時(shí)間對血腦屏障通透性的改變。
　　 4.血腦屏障模型轉(zhuǎn)運(yùn)納米氧化鋁方式:
　　 (1)以Cy5.5熒光標(biāo)記納米氧化鋁對血腦屏障模型進(jìn)行染毒，分別比較0、2、4、6、8、12h不同染毒時(shí)間對血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)納米氧化鋁的改變。
　　 (2)以0.025 mg/ml、0.05 mg/mlCy5.5熒光標(biāo)記納米氧化鋁顆粒對BBB模型進(jìn)行染毒，比較不同染毒濃度對血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)納米氧化鋁的改變。
　　 (

4、3) Cy5.5熒光標(biāo)記納米氧化鋁顆粒對BBB模型進(jìn)行染毒，分別在4℃、37℃孵育，比較不同溫度對血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)納米氧化鋁的改變。
　　 結(jié)果：
　　 1.納米氧化鋁顆粒在溶液中的分散情況:
　　 (1)納米氧化鋁顆粒粒徑分布均勻，平均粒徑為149.2 nm，Zeta電位為47.6 mV。
　　 (2)納米氧化鋁顆粒粒徑分布均勻，呈規(guī)則球形。
　　 2.建立體外血腦屏障模型:原代培養(yǎng)新生1-3天Wi

5、star大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞及星型膠質(zhì)細(xì)胞純度大于90％，BBB有效性檢測達(dá)到體外模型建立水平。
　　 3.納米氧化鋁對血腦屏障通透性的影響:
　　 (1)與0 mg/ml相比，0.025 mg/ml、0.05 mg/ml組蘆丁吸光值明顯增加(P＜0.05)。
　　 (2)與0h相比，染毒2h，4h，6h，8h組，蘆丁吸光值明顯增加(P＜0.05)。
　　 4.血腦屏障模型轉(zhuǎn)運(yùn)納米氧化鋁方式:
　　

6、 (1)隨時(shí)間的增加，Cy5.5熒光標(biāo)記納米氧化鋁吸光值增加(P＜0.05)。
　　 (2)與0.025 mg/ml組比，0.05 mg/ml組納米氧化鋁吸光值增加(P＜0.05)。
　　 (3)與4℃組比，37℃組納米氧化鋁吸光值增加(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.納米氧化鋁對血腦屏障通透性的影響存在劑量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)關(guān)系。
　　 2.主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)、被動(dòng)擴(kuò)散方式參與了納米氧化鋁在血腦屏