嗜鉻粒蛋白A衍生多肽CHR對(duì)膿毒癥小鼠血腦屏障通透性的影響.pdf

1、目的：探討嗜鉻粒蛋白A衍生多肽CGA47-66（chromofungin，CHR）對(duì)膿毒癥小鼠血腦屏障（BBB）通透性的影響。
　　方法：
　?。?）取健康雄性C57BL/6小鼠72只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為L(zhǎng)PS作用1、3、6、12、24h組和正常對(duì)照組，每組12只。LPS各組腹腔注射LPS10mg/kg，正常對(duì)照組給予等量生理鹽水。各組取6只小鼠處死后取腦組織，計(jì)算腦含水量；其余6只小鼠經(jīng)尾靜脈注射伊文思藍(lán)（EB）溶液4mL

2、/kg1 h后處死取腦組織，采用化學(xué)比色法測(cè)定EB含量，以反映血腦屏障通透性，western blot法檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)腦血管ZO-1、Claudin-5蛋白表達(dá)變化。
　　（2）取C57BL/6小鼠60只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為生理鹽水對(duì)照組（NS組）、LPS組、低劑量CHR預(yù)處理組（CL+LPS組）及高劑量CHR預(yù)處理組（CH+LPS組），每組15只。LPS組腹腔注射5mg/mL LPS0.1ml，NS組注射等量NS，CL+LPS組和

3、CH+LPS組于LPS注射前10min分別腹腔注射15.5μg/kg、77.5μg/kg CHR。6h后檢測(cè)腦含水量和EB含量；采用熒光示蹤法定性觀察BBB通透性變化；蘇木素-伊紅（HE）染色后觀察腦組織病理學(xué)改變；Western-blot檢測(cè)緊密連接蛋白（TJs）相關(guān)蛋白ZO-1、Claudin-5表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　?。?）與正常對(duì)照組比較，LPS作用3h和6h后小鼠腦含水量顯著升高[（80.75±1.27）％、（

4、80.14±0.49）%比（78.24±0.50）%，均P<0.01]，之后逐漸下降至正常對(duì)照組水平；注射LPS后6、12、24h腦組織 EB含量較正常對(duì)照組明顯增加，并呈時(shí)間依賴(lài)性（μg/g：19.39±3.09、20.53±6.45、31.79±4.61比7.75±1.23，均P<0.01）。LPS作用6h后檢測(cè)到ZO-1及claudin-5蛋白表達(dá)量明顯降低，并隨時(shí)間逐漸減少。
　?。?）LPS組腦含水量及EB含量均 NS組

5、明顯升高[腦含水量：（79.77±0.62）%比（78.28±0.44）%，P<0.01；EB含量（μg/g）：13.87±4.5比7.13±1.76，P<0.05]；而兩個(gè)CHR預(yù)處理組均可逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的腦含水量和EB含量增高，以CH+LPS組效果更加明顯[腦含水量：（78.15±0.73）%比（79.77±0.62）%，EB（μg/g）：7.09±2.59比13.87±4.50，均P<0.05]。EB熒光觀察結(jié)果顯示，NS組熒光信

6、號(hào)僅存在于腦膜；LPS組腦實(shí)質(zhì)中可見(jiàn)EB熒光廣泛分布，說(shuō)明EB滲漏較NS組明顯；兩個(gè)CHR預(yù)處理組腦實(shí)質(zhì)中EB熒光減少，說(shuō)明EB滲漏明顯減少，且以高劑量組改善更為明顯。HE染色顯示，NS組腦血管結(jié)構(gòu)清晰，周?chē)g隙未見(jiàn)明顯增大；LPS組腦組織結(jié)構(gòu)疏松，小血管周?chē)g隙明顯增寬，水腫明顯；兩個(gè)CHR預(yù)處理組腦水腫較LPS組有所改善，以高劑量組作用更加明顯。同時(shí)，與LPS組相比，CHR處理后ZO-1及claudin-5表達(dá)增加，且CH+LPS組