HIV--gp120對神經(jīng)小膠質(zhì)細胞中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)表達的影響及其機制研究.pdf

1、艾滋病是對人類健康威脅最為嚴(yán)重的一種疾病，HIV則是致病的病原體。HIV-1的膜糖蛋白gp120和gp41在其感染過程中發(fā)揮著重要作用，在病毒進入細胞并與之相互作用時，gp120是一種典型的HIV毒性蛋白，對神經(jīng)細胞具有毒性。本課題研究HIV-gp120對神經(jīng)小膠質(zhì)細胞BV2中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)表達的影響和可能的機制。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴MTT

2、實驗確定gp120作用于小膠質(zhì)細胞BV2的合適濃度。與對照相比，用2ng/mL，10ng/mL和50 ng/mL的gp120處理12h后細胞的活力分別為80.1％，79.7％和80.5％。而劑量為1000 ng/mL的gp120使存活力降低至29.2％。因此，在后續(xù)實驗中選擇使用10 ng/mL的劑量，使其對細胞僅產(chǎn)生適當(dāng)?shù)亩拘宰饔?。⑵HIV-gp120分別作用于BV2細胞1h，3h，6h，9h，12h和24 h，收集細胞樣品并提取胞內(nèi)

3、蛋白進行Western blotting檢測，分析BDNF的表達情況。結(jié)果顯示:與對照相比proBDNF和mBDNF蛋白在gp120刺激BV2細胞3h后表達量最高，分別是對照組的1.9倍和2.2倍。除此還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)gp120處理后小膠質(zhì)細胞BV2被激活，并且伴隨著CD11b表達量的升高，其表達量是對照組的1.62倍。與此同時，gp120處理的BV2細胞內(nèi)也出現(xiàn)了Wnt3a和β-catenin的積累，Wnt5a的表達量沒有顯著性變化。因此，

4、推測gp120是通過Wnt/β-catenin經(jīng)典信號通路途徑激活BV2細胞，促進BDNF的表達。⑶用不同濃度的Wnt3a蛋白(25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL)對信號通路進行激活，用不同濃度的DKK1(10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL)和IWR-1（0.1μM、1μM、10μM）抑制經(jīng)典信號通路來進行更深入的研究。結(jié)果表明，Wnt3a(100 ng/mL)處理BV2細胞，增加了β-catenin的

5、表達，其表達量是對照組的24倍，表示經(jīng)典Wnt信號通路的激活。有趣的是，Wnt3a孵育后的小膠質(zhì)細胞中BDNF表達上調(diào)1.81倍。相反，DKK1(100 ng/mL)和IWR-1（10μM）處理的細胞中則明顯抑制了BDNF的表達，使其表達量分別下降64.6％和79.8％。⑷在探索出DKK1和IWR-1的最適濃度后，本實驗繼續(xù)探究DKK1或IWR-1是否可以抑制由gp120引起的BDNF表達量的升高。結(jié)果表明:單獨用DKK1或IWR-1處

6、理BV2細胞組與gp120處理細胞組相比BDNF的表達量分別降低68.6％和62.6％。DKK1和gp120同時處理組或IWR-1和gp120同時處理組，BDNF的表達量與gp120處理細胞組相比分別降低70％和72.6％。此結(jié)果表明，DKK1和IWR-1可以顯著性抑制由gp120引起的BDNF表達量的上調(diào)，說明阻斷Wnt/β-catenin經(jīng)典信號通路可以抑制BDNF的表達。進一步用DKK1阻斷小膠質(zhì)細胞BV2中的經(jīng)典信號通路，探究D