ARDS大鼠血小板MAPKs信號通路變化研究.pdf

1、目的：
　　急性呼吸窘迫綜合癥（ARDS）是由多種病因?qū)е碌囊环N特殊類型的急性呼吸衰竭，臨床常見，治療困難，病死率較高。雖然近五十年來醫(yī)學(xué)界對其進(jìn)行了大量研究，細(xì)致的發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚。近年發(fā)現(xiàn)，ARDS時(shí)血液循環(huán)中存在高凝狀態(tài)，血小板發(fā)生活化并可能在ARDS發(fā)病中起重要作用。本研究意在討論ARDS時(shí)血小板活化的信號通路，為臨床ARDS的防治提供新的理論依據(jù)。
　　方法：
　　將30只健康SD大鼠，隨機(jī)分為5組。OA

2、組為實(shí)驗(yàn)組，采用尾靜脈注射油酸（0.25ml/kg）的方法，制備大鼠ARDS模型；NS組為對照組，尾靜脈注射同體積生理鹽水。在注射生理鹽水后2h或注射油酸后2h、6h、24h、72h，從動物腹主動脈采血，分離血小板，提取血小板蛋白,采用Western blotting技術(shù)檢測血小板內(nèi)絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）3條通路上的主要蛋白激酶JNK、ERK、p38 MAPK的磷酸化水平。動物處死后，觀察其雙肺變化；稱Lung weight，

3、計(jì)算Lung index；分離肺臟，右肺稱重后烘干，稱取干重，計(jì)算肺濕/干比值并記錄；左肺經(jīng)10％福爾馬林溶液固定1周后做病理切片，HE染色，光鏡觀察。將血小板內(nèi)3種蛋白激酶ERK、JNK、p38 MAPK的磷酸化水平與肺組織病理變化進(jìn)行對照分析，探討ARDS時(shí)血小板MAPKs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的改變及其與ARDS發(fā)病的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.動物一般狀況變化實(shí)驗(yàn)組大鼠在注射油酸后2～3分鐘即開始出現(xiàn)呼吸困難，癱軟無力，活動減

4、少，進(jìn)飲食減少。對照組無異常變化。
　　2.肺系數(shù)和肺R w/d變化在注射油酸后2～24h期間，實(shí)驗(yàn)組動物肺重、肺系數(shù)和肺濕/干重比值均有不同程度增加，以2h最嚴(yán)重。對照組無異常變化。
　　3.肺組織病理學(xué)變化外觀可見NS組肺臟呈粉紅色，大小正常；2～24h實(shí)驗(yàn)組動物肺臟明顯腫脹，外觀呈暗紅色花斑狀；72h組，肺臟腫脹減輕，外觀呈灰白色，彈性差。鏡下觀察，2～24h實(shí)驗(yàn)組動物肺泡腔內(nèi)有大量紅、白細(xì)胞和液體滲出，有透明膜形成；

5、肺泡間隔增寬，有大量炎細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，小血管有微血栓形成，肺間質(zhì)有彌漫性出血改變；72h組，上述病變減輕，但出現(xiàn)肺臟纖維化和胸膜纖維化；對照組無異常變化。
　　4.血小板內(nèi)蛋白激酶ERK、JNK、p38 MAPK磷酸化水平變化與NS組相比，2～24h實(shí)驗(yàn)組動物血小板內(nèi)蛋白激酶ERK、JNK、p38 MAPK磷酸化水平明顯增高，其中磷酸化的ERK和p38 MAPK在2h表達(dá)量最高，JNK在6h表達(dá)量最高，之后均逐漸降低