血小板內(nèi)皮聚集受體1調(diào)控血小板及血管功能的機(jī)制研究.pdf

1、血小板內(nèi)皮聚集受體1（Platelet Endothelial Aggregation Receptor1，PEAR1，亦稱為MEGF12或JEDI）屬于多表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域家族的跨膜蛋白，主要表達(dá)于血小板及內(nèi)皮細(xì)胞。研究認(rèn)為，PEAR1是血小板與血小板間相互接觸的受體蛋白，在血小板的活化聚集過程中起著重要作用。
　　血管內(nèi)皮細(xì)胞在維持血管健康穩(wěn)態(tài)及損失修復(fù)中起重要作用。血小板作為血管內(nèi)皮損傷的直接效應(yīng)細(xì)胞，在內(nèi)皮相關(guān)的生理病理

2、功能中發(fā)揮重要作用。臨床研究認(rèn)為，PEAR1的多個(gè)SNP位點(diǎn)與血小板功能及血管功能密切相關(guān)。本研究對(duì)PEAR1在血小板及內(nèi)皮細(xì)胞中的功能及作用機(jī)制進(jìn)行研究。
　　對(duì)PEAR1在血小板中的定位檢測(cè)顯示，當(dāng)血小板被活化后，PEAR1在膜上的表達(dá)明顯上升。PEAR1的抗胞外結(jié)構(gòu)域抗體可作為活化配體對(duì)血小板進(jìn)行活化。進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PEAR1可能通過ITAM信號(hào)途徑引起血小板活化。為探尋PEAR1在血小板上的配體，以純化的PEAR1-EM

3、I結(jié)構(gòu)域蛋白對(duì)血小板裂解液進(jìn)行免疫沉淀，質(zhì)譜分析結(jié)果顯示，PEAR1與血小板的GPIb、ɑIIbβ3、p-selectin均有結(jié)合。另外，為了研究PEAR1在血小板中的功能，我們通過CRISPR/Cas9 gene targeting技術(shù)構(gòu)建了PEAR1基因敲除小鼠，對(duì)PEAR1基因敲除小鼠的血小板進(jìn)行血小板功能分析發(fā)現(xiàn)該小鼠的血小板對(duì)低濃度膠原及凝血酶刺激的血小板聚集反應(yīng)降低，而對(duì)血小板的血塊收縮及纖維蛋白原上的鋪展影響較弱。提示PE

4、AR1可能影響血小板上GPVI受體及TP受體功能，而對(duì)ɑIIbβ3介導(dǎo)的外向內(nèi)信號(hào)無影響。
　　PEAR1不僅表達(dá)于血小板，在內(nèi)皮細(xì)胞亦有表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)在一般貼壁培養(yǎng)條件下，PEAR1在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）的細(xì)胞膜和核內(nèi)都有定位，而當(dāng)HUVEC在基質(zhì)膠上培養(yǎng)形成血管樣結(jié)構(gòu)時(shí)，PEAR1主要定位于細(xì)胞膜上。進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PEAR1抗體可完全抑制

5、HUVEC細(xì)胞的成管性，但對(duì)HUVEC細(xì)胞的增殖能力并沒有影響。而當(dāng)血小板與 HUVEC共孵育并將HUVEC在基質(zhì)膠上培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，血小板同樣能抑制 HUVEC細(xì)胞的成管能力。而純化的PEAR1 EMI結(jié)構(gòu)域多肽能逆轉(zhuǎn)血小板抑制HUVEC細(xì)胞成管的能力。提示PEAR1的EMI結(jié)構(gòu)域是PEAR1與血小板上PEAR1配體相互作用的主要結(jié)構(gòu)。以PEAR1抗體處理HUVEC細(xì)胞進(jìn)行劃痕試驗(yàn)，結(jié)果顯示 PEAR1并不影響細(xì)胞的遷移能力。因此我們認(rèn)為