脂聯(lián)素通過調(diào)節(jié)2型糖尿病大鼠骨微環(huán)境氧化應激水平對成骨細胞影響的實驗研究.pdf

1、目的：
　　本實驗旨在探討2型糖尿病(DM)大鼠骨微環(huán)境氧化應激(OS)水平與成骨細胞(OB)分化調(diào)節(jié)因子Runx2的關(guān)系，同時觀察脂聯(lián)素(APN)干預是否可以通過改善骨微環(huán)境氧化應激影響成骨細胞分化，進一步探討糖尿病性骨質(zhì)疏松癥(DOP)的發(fā)生機制及早期干預措施，為臨床預防及治療糖尿病性骨質(zhì)疏松癥提供新思路。
　　方法：
　　選擇4周齡雄性SD大鼠隨機分為正常對照組（n=18只)、糖尿病模型組（n=42只）。對照組予

2、普通飼料喂養(yǎng)，模型組高膽固醇高糖喂養(yǎng)2個月，并一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)30mg/kg建2型DM大鼠模型。剔除造模失敗、死亡大鼠，建模成功的大鼠分為糖尿病組（DM組=18只）和脂聯(lián)素干預組（APN組=18只），APN組予腹腔注射球形脂聯(lián)素10μg/kg*d干預，分別于第4、8、12周末處死動物，迅速取出雙側(cè)股骨及脛骨，提取一側(cè)股骨及脛骨骨髓液，經(jīng)離心分別留取骨髓細胞及骨髓上清液，另一側(cè)股骨經(jīng)測定骨密度后脫鈣包埋切片。ELISA、

3、RT-PCR等方法檢測Runx-2、BALP、AOPPs，骨組織免疫組化染色觀察AGEs表達，HE染色觀察骨質(zhì)量（骨小梁結(jié)構(gòu)、密度）及脂肪細胞量。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠血糖水平比較
　　隨著喂養(yǎng)時間的延長，可見DM組大鼠血糖水平明顯升高。APN干預后，血糖有所改善。
　　2.三組大鼠骨髓上清液AOPP水平比較
　　隨著喂養(yǎng)時間延長，正常大鼠組骨髓上清液AOPP無明顯變化，在DM組、APN干預組均升高

4、（P<0.05），但APN干預組升高幅度較DM組小。在4周時，DM組較正常對照組AOPP水平升高（P<0.05），APN干預后較DM組無明顯差異；8周及12周時DM組AOPP水平升高更顯著（P<0.05），APN干預后，8周時有輕微下降趨勢，12周時較DM組下降且有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3.三組大鼠骨組織免疫組化AGEs表達比較
　　隨著時間變化，正常大鼠組骨組織免疫組化表達AGEs無明顯差異，在DM組、APN干

5、預組表達均升高，（P<0.05），但APN干預組升高幅度較DM組小。在4周時，DM組較正常對照組AGEs表達水平升高（P<0.05），APN干預后較DM組降低（P<0.05），8周及12周時DM組AGEs表達升高更顯著（P<0.05），APN干預后較DM組降低（P<0.05），且12周較8周AGEs下降幅度顯著增大。
　　4.三組大鼠骨髓細胞Runx2 mRNA表達水平及骨髓上清液BALP水平比較
　　隨著飼養(yǎng)時間增加，正常

6、對照組、DM組、APN干預組Runx2 mRNA、BALP水平均逐漸降低，且DM組下降幅度更顯著（P<0.05）。在4周時，兩兩組間比較均無明顯統(tǒng)計學差異；8周時，DM組較正常對照組Runx2 mRNA、BALP水平開始降低， APN干預后較DM組，上述指標下降幅度減低，水平升高（P<0.05）；12周時，DM組較對照組明顯降低，APN干預后較DM組上述指標升高（P<0.05），且APN組與DM組間各指標的差異較8周時顯著。
　　

7、5.三組大鼠股骨骨密度（BMD）
　　比較4周與12周隨時間變化，正常對照組、DM組、APN干預組三組BMD值降低；4周時三組兩兩比較BMD差異性較小無統(tǒng)計學意義，但是12周時，DM組較對照組BMD下降，APN干預后較DM組有所升高且有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　6.骨組織切片HE染色觀察骨小梁結(jié)構(gòu)、脂肪細胞含量比較
　　成模后培養(yǎng)4周時，三組間骨小梁結(jié)構(gòu)尚可，脂肪細胞量少；8周及12周時，三組骨小梁結(jié)構(gòu)出現(xiàn)不同

8、程度破壞，以DM組明顯，骨小梁變細、變稀疏，部分骨小梁結(jié)構(gòu)消失，髓腔擴大，出現(xiàn)較多脂肪細胞，APN干預后骨小梁結(jié)構(gòu)有所恢復，脂肪細胞含量減少，且12周時上述變化更明顯。
　　結(jié)論：
　　1.2型糖尿病大鼠骨髓微環(huán)境中氧化應激水平明顯升高，可能對成骨分化的調(diào)節(jié)因子Runx2有直接抑制作用，可能引起成骨細胞分化減少，骨形成降低，結(jié)合AGEs水平偏高，骨膠原蛋白非酶糖化影響骨質(zhì)及骨密度，均可能參與糖尿病性骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生。