西格列汀對2型糖尿病大鼠的骨保護(hù)作用與氧化應(yīng)激的關(guān)系.pdf

1、【目的】
　　1.探討西格列汀干預(yù)對高脂高糖飲食聯(lián)合STZ誘導(dǎo)T2DM大鼠的骨密度、骨組織形態(tài)和骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物的影響；
　　2.觀察西格列汀對T2DM大鼠的骨保護(hù)作用與氧化應(yīng)激的關(guān)系；
　　3.探討西格列汀對T2DM大鼠的骨保護(hù)作用與p-ERK1/2/PPARγ表達(dá)的關(guān)系。【方法】
　　1.構(gòu)建2型糖尿病大鼠模型：SD大鼠高脂高糖喂養(yǎng)8周，腹腔注射1％ STZ(30mg/kg)，連續(xù)3次空腹血糖≥16.7 mmol

2、/L確認(rèn)為造模成功。
　　2.西格列汀干預(yù)：造模成功后，大鼠隨機(jī)分正常組(NC組)、2型糖尿病組(T2DM組)和2型糖尿病西格列汀干預(yù)組(SIT組)(均n=10)。SIT組予以西格列汀灌胃干預(yù)20周，其余大鼠予以生理鹽水灌胃。
　　3.相關(guān)指標(biāo)檢測：常規(guī)法測量血糖、體重；行腹腔注射葡萄糖耐量實驗(IPGTT)，并計算曲線下面積(AUC)；放射免疫法檢測血清胰島素(INS)；雙能X線骨密度儀(DEXA)檢測骨密度；HE染色行股

3、骨組織形態(tài)學(xué)檢測；酶聯(lián)免疫吸附法檢測OCN和TRACP-5b；AMP緩沖液法檢測ALP。
　　5.相關(guān)基因及蛋白的檢測：應(yīng)用RT-PCR及 Western Blot法分別檢測大鼠股骨成骨細(xì)胞p-ERK1/2、PPARγ、p47phox、Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表達(dá)水平。
　　【結(jié)果】
　　1.造模成功糖尿病大鼠血糖明顯高于 NC組(p<0.05)，平均空腹血糖達(dá)(18.46±1.67)mmol/L，血清INS

4、水平低于NC組(p<0.05)。
　　2.西格列汀干預(yù)20周后，T2DM和SIT組血糖明顯高于NC組(p<0.05)，SIT組血糖低于T2DM組(p<0.05)；T2DM組體重低于NC組(p<0.05)。T2DM組和SIT組血清INS低于NC組(P<0.05)，SIT組血清INS高于T2DM組(P<0.05)。行IPGTT后，T2DM組、SIT組各點血糖和AUC明顯高于NC組(P<0.05)；SIT組各點血糖和AUC在NC組和T2

5、DM組之間，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3. T2DM組骨形成標(biāo)志物ALP和OCN表達(dá)低于NC組(p<0.05)，骨吸收標(biāo)志物TRACP-5b表達(dá)高于NC組(p<0.05)；SIT組ALP水平低于NC組(p<0.05)，高于T2DM組(p<0.05)；SIT組OCN表達(dá)高于T2DM組(p<0.05)，TRACP-5b表達(dá)低于 T2DM組(p<0.05)。T2DM組下肢和脊柱骨密度明顯低于 NC組(p<0.05)，SIT組下肢骨密度

6、明顯高于T2DM組(p<0.05)，SIT組脊柱骨密度介于NC組和T2DM組之間，無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　4.骨組織形態(tài)學(xué)分析：與 NC組相比，T2DM組骨皮質(zhì)變薄，骨小梁排列紊亂，間距變寬，骨髓腔明顯擴(kuò)張，骨細(xì)胞數(shù)量減少，空缺骨陷窩細(xì)胞顯著增多。與T2DM組相比，SIT組骨板層次清晰，結(jié)構(gòu)致密，骨小梁排列整齊，間距略窄，骨髓腔變窄，骨細(xì)胞清晰完整，空缺骨陷窩細(xì)胞少見。
　　5. T2DM組和SIT組大鼠股骨成骨

7、細(xì)胞 p-ERK1/2、PPARγ、p47phox和Bax/Bcl-2 mRNA和蛋白表達(dá)高于 NC組(p<0.05)；SIT組 p-ERK1/2、p47phox和Bax/Bcl-2表達(dá)低于T2DM組(p<0.05)，而PPARγmRNA和蛋白表達(dá)與T2DM組相比無明顯差異。
　　【結(jié)論】
　　1.西格列汀可有效降低T2DM大鼠空腹血糖，改善胰島功能；
　　2.西格列汀可增加T2DM大鼠骨密度，改善骨組織微結(jié)構(gòu)，促進(jìn)骨