載脂蛋白E及其擬肽對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期血腦屏障破壞的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：明確載脂蛋白E(Apolipoprotein E, APOE表示基因，apoE表示蛋白)與蛛網(wǎng)膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage, SAH)后早期腦損傷(Early brain injury, EBI)中血腦屏障破壞的相關(guān)性，并探討其可能的作用機(jī)制。在此基礎(chǔ)上，驗(yàn)證基于apoE的治療策略(apoE擬肽)是否可以改善SAH后早期的血腦屏障破壞，減輕EBI。旨在進(jìn)一步揭示SAH后EBI的發(fā)生機(jī)制，為尋找治療SA

2、H的新靶點(diǎn)、開發(fā)新的治療藥物提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)支持。
　　方法：
　　1、探討apoE與SAH后EBI中血腦屏障破壞的相關(guān)性。125只成年健康野生型雄性C57BL6/J小鼠(20±1.5g；8-10周)，隨機(jī)分為假手術(shù)組(SHAM)和SAH組，SAH組再細(xì)分為6小時(shí)(WT-6H)、24小時(shí)(WT-24H)、48小時(shí)(WT-48H)和72小時(shí)(WT-72H)4個(gè)亞組(n=25)。運(yùn)用國(guó)際公認(rèn)的血管內(nèi)穿刺法構(gòu)建野生型C57B

3、L6/J小鼠的SAH模型；運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡和免疫熒光染色等技術(shù)檢測(cè)各組小鼠SAH后apoE的表達(dá)情況；運(yùn)用腦含水量檢測(cè)、血腦屏障通透性檢測(cè)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分、疲勞轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)和磁共振T2加權(quán)成像等技術(shù)分析apoE與SAH后EBI中血腦屏障破壞的相關(guān)性。
　　2、探討apoE減輕SAH后EBI中血腦屏障破壞的機(jī)制。野生型C57BL6/J小鼠(19.6±1.4g；8-10周)和apoE基因敲除(APOE-/-,KO)小鼠

4、(19.8±1.8g；8-10周)各50只，分別隨機(jī)分成野生型假手術(shù)組(WT-SHAM)、野生型 SAH-48小時(shí)組(WT-48H)、敲除鼠假手術(shù)組(KO-SHAM)和敲除鼠 SAH-48小時(shí)組(KO-48H)，(n=25)。運(yùn)用國(guó)際公認(rèn)的血管內(nèi)穿刺法構(gòu)建小鼠的SAH模型；運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡和免疫熒光染色等技術(shù)檢測(cè)各組小鼠SAH后apoE的表達(dá)情況；運(yùn)用腦含水量檢測(cè)、血腦屏障通透性檢測(cè)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分、疲勞轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)和磁

5、共振T2加權(quán)成像等技術(shù)評(píng)估apoE基因敲除鼠與野生型小鼠SAH后EBI中血腦屏障破壞的差異情況，并探討可能機(jī)制。
　　3、探討基于apoE的治療策略是否可以改善SAH后EBI中的血腦屏障破壞。105只野生型C57BL6/J小鼠(19.8±1.7g；8-10周)隨機(jī)分為假手術(shù)組(SHAM)和 SAH組，SAH組再細(xì)分為安慰劑組(WT-W8H)和 apoE擬肽COG1410治療組(WC-48H)共2個(gè)亞組(n=25)。運(yùn)用國(guó)際公認(rèn)的血

6、管內(nèi)穿刺法構(gòu)建野生型 C57BL6/J小鼠的 SAH模型；治療組小鼠予以 apoE擬肽COG1410(1mg.kg-1.d-1)尾靜脈注射，安慰劑組予以等量生理鹽水尾靜脈注射。運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡和免疫熒光染色等技術(shù)檢測(cè)各組小鼠SAH后apoE的表達(dá)情況；運(yùn)用腦含水量檢測(cè)、血腦屏障通透性檢測(cè)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分、疲勞轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)和磁共振T2加權(quán)成像、18F-FDG PET/CT等技術(shù)評(píng)估apoE擬肽COG1410對(duì)SAH后早期血

7、腦屏障破壞的改善作用。
　　結(jié)果：
　　1、SAH后，小鼠腦組織內(nèi)的apoE表達(dá)逐漸升高，到出血后48小時(shí)達(dá)到高峰，72小時(shí)開始逐漸下降。運(yùn)用免疫熒光染色，我們發(fā)現(xiàn)SAH后apoE主要由星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)apoE在SAH后毛細(xì)血管周圍的表達(dá)明顯增加。同時(shí)，小鼠的腦水腫、血腦屏障通透性等反映 EBI指標(biāo)也在傷后48小時(shí)達(dá)到高峰。因此。我們推測(cè)apoE對(duì)SAH后EBI中的血腦屏障破壞具有重要的相關(guān)性。
　　2

8、、apoE基因敲除后，小鼠SAH后的神經(jīng)功能預(yù)后明顯惡化，血腦屏障破壞更加明顯，伊文思藍(lán)、免疫球蛋白 G(IgG)滲出較野生鼠明顯增加，磁共振T2高信號(hào)區(qū)域也較野生鼠明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)apoE可以通過調(diào)控SAH后的EBI中CypA-NF-κB相關(guān)的信號(hào)通路，從而減輕神經(jīng)炎癥反應(yīng)，減輕SAH后的血腦屏障破壞。
　　3、給予野生型SAH小鼠apoE擬肽COG1410治療后，小鼠的血腦屏障破壞明

9、顯減少，伊文思藍(lán)和免疫球蛋白G(IgG)滲出較安慰劑治療組明顯減少，磁共振T2高信號(hào)區(qū)域減少，小鼠神經(jīng)功能明顯改善，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)apoE擬肽COG1410也可以通過調(diào)控SAH后的EBI中CypA-NF-κB相關(guān)的信號(hào)通路，從而減輕神經(jīng)炎癥反應(yīng)，減輕血腦屏障的破壞。
　　結(jié)論：apoE可以通過調(diào)控SAH后的EBI中CypA- NF-κB相關(guān)的信號(hào)通路，減輕神經(jīng)炎癥反應(yīng)，從而減輕血腦屏障的破壞，對(duì)