痛瀉要方治療IBS文獻(xiàn)研究及其對(duì)Pi-IBS模型大鼠肥大細(xì)胞活化的干預(yù)機(jī)制.pdf

1、目的:
　　1、從文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)的角度分析近年來(lái)痛瀉要方治療IBS的文獻(xiàn)特征和規(guī)律，預(yù)測(cè)文獻(xiàn)的發(fā)展趨勢(shì)，為IBS的中醫(yī)藥治療提供臨床和科研參考。
　　2、試通過(guò)新生母子分離-慢性不可預(yù)知性多重應(yīng)激(CUMS)-TNBS三因素疊加建立肝郁脾虛型PI-IBS病證結(jié)合大鼠模型。
　　3、研究痛瀉要方對(duì)病證結(jié)合PI-IBS模型大鼠腸黏膜肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)及活化的影響，探討痛瀉要方對(duì)PI-IBS模型大鼠肥大細(xì)胞活化相關(guān)的干預(yù)機(jī)制及其治療的

2、最佳劑量。
　　方法:
　　1、制定檢索策略，檢索中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(SinoMed)，共檢索出1996年-2014年痛瀉要方治療腸易激綜合征臨床相關(guān)文獻(xiàn)共393篇，根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)，篩選出符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)308篇，分析累積文獻(xiàn)量、期刊載文量、文獻(xiàn)發(fā)表地區(qū)、核心期刊、文獻(xiàn)研究類(lèi)型等多種特征，用數(shù)學(xué)與統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法來(lái)進(jìn)行計(jì)量學(xué)分析，并對(duì)文獻(xiàn)量的增長(zhǎng)趨勢(shì)做線(xiàn)性回歸分析，探討文獻(xiàn)的發(fā)展規(guī)律，預(yù)測(cè)2015年和2016年文獻(xiàn)

3、的發(fā)展趨勢(shì)。
　　2、本研究采用新生母子分離、慢性不可預(yù)知性多重應(yīng)激、TNBS灌腸三種因素不同組合疊加造模，評(píng)價(jià)不同模型大鼠與理想模型病證結(jié)合的吻合度。將新生SD雄性大鼠隨機(jī)分為新生母子分離組、母子分離+TNBS組、母子分離+慢性應(yīng)激組、慢性應(yīng)激+TNBS組、母子分離+慢性應(yīng)激+TNBS三因素組、正常組各8只。從大鼠出生后第2天到第14天，進(jìn)行母子分離造模，每天與母鼠分離180分鐘，分離后在一起飼養(yǎng)，第6周分離法造模結(jié)束;從第7周

4、開(kāi)始進(jìn)行TNBS灌腸造模，TNBS造模后兩周等炎癥恢復(fù)，第9周進(jìn)行為期21天的慢性不可預(yù)知性多重應(yīng)激，第11周造模全部完成（不同模型組合選擇不同造模方法，正常組不予處理）。造模完成后以慢性應(yīng)激造模為時(shí)間截點(diǎn)，通過(guò)對(duì)慢性應(yīng)激造模前后曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、抓力測(cè)定、AWR、糞便含水量的測(cè)定來(lái)評(píng)價(jià)模型肝郁、脾虛、內(nèi)臟敏感性增高和腹瀉狀態(tài)與理想模型的符合程度，判斷造模是否成功，選出較理想的造模方法。
　　3、在建立較理想的PI-IBS病證結(jié)合模型基礎(chǔ)

5、上，用痛瀉要方高中低劑量和升麻素苷進(jìn)行干預(yù)，同時(shí)用色甘酸二鈉做陽(yáng)性對(duì)照，將新生SD雄性大鼠隨機(jī)分為痛瀉要方高劑量組、中劑量組、低劑量組、色甘酸二鈉組、升麻素苷組、模型組及正常組共7個(gè)組，每組11只，按照模型評(píng)價(jià)選出的最佳造模方法造模，造模完成后對(duì)模型大鼠進(jìn)行疾病和證候特征的整體評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)完成后給藥，痛瀉要方高劑量組給藥濃度為1g/ml，中劑量組0.5g/ml，低劑量組0.25g/ml，升麻素苷組（尾靜脈注射）0.04mg/ml，色甘酸二

6、鈉灌胃10mg/ml，給藥體積為1ml/100g，模型組和正常組給予同等劑量的生理鹽水，給藥兩周后評(píng)價(jià)藥物對(duì)PI-IBS病證結(jié)合模型大鼠糞便含水量及行為學(xué)指標(biāo)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、AWR、抓力的影響，檢測(cè)結(jié)腸黏膜肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)、MCT、c-Fos及細(xì)胞因子（IL-1β、TNF-α、組胺），神經(jīng)肽類(lèi)物質(zhì)NO、SP、VIP的變化，探討痛瀉要方及其佐藥防風(fēng)主要成分升麻素苷單體治療PI-IBS的作用機(jī)制、療效及最佳劑量，同時(shí)比較與陽(yáng)性對(duì)照藥物的優(yōu)效性。

7、>　　結(jié)果:
　　1、文獻(xiàn)特征和規(guī)律
　　(1)累積文獻(xiàn)量:從1996年11月第1篇痛瀉要方治療IBS相關(guān)臨床文獻(xiàn)的出現(xiàn)到2014年11月截止，有關(guān)本研究的文獻(xiàn)一共有308篇，逐年增長(zhǎng)迅速，預(yù)測(cè)2015年和2016年中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(SinoMed)中收錄的文獻(xiàn)量為351篇和390篇，總體仍呈上升趨勢(shì);
　　(2)文獻(xiàn)發(fā)表地區(qū):本研究文獻(xiàn)發(fā)表涉及全國(guó)30個(gè)省市自治區(qū)，文獻(xiàn)量排名前6位的省份為河南、廣東、江蘇、浙江

8、、廣西和湖南，共占總文獻(xiàn)量分布的56％;
　　(3)研究方向:臨床療效觀察所占比例最大(94.8％)，治療機(jī)制和臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)方面的文獻(xiàn)有逐年增加的趨勢(shì);
　　(4)干預(yù)措施分型:痛瀉要方經(jīng)典方加減治療腸易激綜合征占治療措施總頻次的47.73％，痛瀉要方配合心理療法與中藥合方配合外治法所占比例最少，分別為2.6％和0.97％;
　　(5)文獻(xiàn)發(fā)表期刊:陜西中醫(yī)雜志載文量為12，位居第1，河南中醫(yī)、實(shí)用中醫(yī)藥雜志，新中醫(yī)等

9、12家期刊是本研究的核心期刊。
　　2、PI-IBS病證結(jié)合模型的建立與評(píng)價(jià)
　　(1)糞便含水量:造模完成后三因素組糞便含水量均較正常組明顯增加(P＜0.05)，余各模型組糞便含水量變化不明顯;(2)抓力測(cè)定:造模完成后母子分離組、三因素組、CUMS+TNBS組抓力較正常組顯著降低(P＜0.05);(3)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn):造模完成后三因素組總穿格次數(shù)較正常組明顯減少(P＜0.05)，余模型組與正常組相比無(wú)明顯差異;(4) AWR:

10、造模完成后各模型組AWR值較正常組明顯降低(P＜0.05);(5)黏膜病理改變:各模型組及正常組鏡下黏膜結(jié)構(gòu)完整，無(wú)組織壞死及缺損，TNBS+CUMS組、母子分離+TNBS組、三因素組結(jié)腸黏膜符合輕度炎癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　3、痛瀉要方干預(yù)機(jī)制
　　(1)疾病與證候特征評(píng)價(jià):①糞便含水量:用藥前各用藥組和模型組糞便含水量均顯著高于正常組(P＜0.01)，用藥后升麻素苷糞便含水量顯著低于模型組(P＜0.05)，痛瀉要方組與模型組

11、、正常組相比無(wú)顯著差異;②曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn):用藥前后差值比較，痛瀉要方及色甘酸二鈉均有改善PI-IBS模型大鼠總穿格次數(shù)和總穿行距離的作用，其中以痛瀉要方低劑量作用最顯著(P＜0.05)，優(yōu)于色甘酸二鈉，升麻素苷對(duì)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)改善作用;③AWR:用藥前各用藥組及模型組AWR值均明顯低于正常組(P＜0.01)，用藥后痛瀉要方中劑量組、升麻素苷組與模型組相比，AWR值顯著升高(P＜0.05);④抓力:用藥前痛瀉要方高、低劑量組、升麻素苷組、

12、色甘酸二鈉組和模型組抓力均顯著低于正常組(P＜0.05)，用藥后模型組抓力顯著低于正常組(P＜0.05)，各用藥組抓力均高于模型組，其中痛瀉要方高、中劑量組和升麻素苷組與模型組相比差異顯著(P＜0.05)。
　　(2)肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)及活化:①肥大細(xì)胞計(jì)數(shù):甲苯胺蘭染色發(fā)現(xiàn)PI-IBS模型大鼠近端結(jié)腸肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)較正常組明顯增加，痛瀉要方、升麻素苷及色甘酸二鈉均有降低肥大細(xì)胞數(shù)目的作用(P＜0.01)，其中痛瀉要方高、中劑量作用優(yōu)于色

13、甘酸二鈉和升麻素苷(P＜0.05);②MCT，c-Fos免疫熒光:模型組c-Fos和MCT光密度值均顯著高于正常組(P＜0.01)，各用藥組c-Fos和MCT光密度值均顯著低于模型組(P＜0.01)，各用藥組之間無(wú)顯著差異;③MCT WesternBlot蛋白定量:模型組MCT表達(dá)量高于正常組(P＜0.01)，痛瀉要方高劑量組、色甘酸二鈉組MCT表達(dá)量顯著低于模型組(P＜0.05)，而痛瀉要方高劑量組和色甘酸二鈉組之間并無(wú)顯著差異（P＞

14、0.05）;④Elisa檢測(cè)組胺的含量:模型組血清組胺含量明顯高于正常組(P＜0.01)，各用藥組血清組胺含量顯著低于模型組(P＜0.01)，各用藥組之間無(wú)顯著差異。
　　(3)其它血液指標(biāo)檢測(cè)①TNF-α:模型組和除升麻素苷之外的各用藥組血清TNF-α含量顯著高于正常組(P＜0.05)，痛瀉要方和升麻素苷對(duì)模型大鼠血清TNF-α無(wú)顯著影響;②NO:模型組血清NO含量顯著高于正常組(P＜0.05)，痛瀉要方高中劑量、色甘酸二鈉，升

15、麻素苷組血清NO含量較模型組顯著降低(P＜0.01)，痛瀉要方高劑量組作用優(yōu)于色甘酸二鈉(P＜0.05);③IL-1β:各組之間血清IL-β含量無(wú)顯著差異;④VIP和SP:各組之間血漿VIP和SP含量無(wú)顯著差異。
　　結(jié)論:
　　1、本領(lǐng)域相關(guān)期刊文獻(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)呈現(xiàn)平穩(wěn)增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)，痛瀉要方治療IBS的群眾接受度較高，要更加嚴(yán)謹(jǐn)?shù)卦O(shè)計(jì)隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，痛瀉要方治療IBS機(jī)制研究較少，應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)痛瀉要方治療機(jī)制的研究，為IBS的中醫(yī)藥治療

16、提供新進(jìn)展。
　　2、母子分離+TNBS+CUMS三因素疊加造模能更好模仿PMBS病證結(jié)合的疾病及證候特點(diǎn)，是建立肝郁脾虛型PI-IBS大鼠模型的較理想模型。
　　3、痛瀉要方對(duì)肝郁脾虛型PI-IBS大鼠模型的干預(yù)機(jī)制
　　(1)肥大細(xì)胞活化在PMBS模型大鼠的疾病和證候表現(xiàn)中有重要作用①PI-IBS病證結(jié)合大鼠存在內(nèi)臟高敏感、腹瀉的疾病表現(xiàn)和肝郁脾虛的證候改變;②PI-IBS模型大鼠存在肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)增多及其活化相關(guān)細(xì)

17、胞因子MCT，組胺，c-Fos，NO，TNF-α的改變，對(duì)IL-β，SP、VIP無(wú)明顯影響。
　　(2)痛瀉要方可能通過(guò)抑制PI-IBS大鼠肥大細(xì)胞數(shù)目及活化來(lái)改善其疾病和證候表現(xiàn)①痛瀉要方高中低劑量組有不同程度改善PI-IBS病證結(jié)合模型大鼠內(nèi)臟敏感性、肝郁和脾虛行為學(xué)表現(xiàn)的作用，其中以痛瀉要方高劑量組綜合作用最為顯著，但改善腹瀉作用不明顯;②痛瀉要方治療PI-IBS可能是通過(guò)降低肥大細(xì)胞數(shù)目，抑制肥大細(xì)胞活化釋放MCT，組胺和