苦參堿對(duì)宮頸癌細(xì)胞JAK-STAT信號(hào)傳導(dǎo)通路的負(fù)調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：觀察苦參堿（Matrine）對(duì)人宮頸癌Hela、Siha細(xì)胞的增殖抑制作用以及對(duì)JAK-STAT（Janus Kinase/Signal Transducers and Actiators of Transcription）信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響，探討苦參堿是否通過增加SHP2、SOCS3、PIAS1的表達(dá)負(fù)性調(diào)控JAK-STAT信號(hào)傳導(dǎo)通路活性，從而發(fā)揮抑癌效應(yīng)，這為臨床宮頸癌的抗癌藥物研制和應(yīng)用開拓了新方向。
　　研究方

2、法：1、培養(yǎng)人宮頸腺癌Hela細(xì)胞株、人宮頸鱗癌Siha細(xì)胞株。2、采用噻唑藍(lán)比色法（MTT）檢測(cè)不同濃度苦參堿（0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/ml）對(duì)宮頸癌Hela、Siha細(xì)胞作用時(shí)間24h、48h、72h后細(xì)胞的增殖情況，以不加藥細(xì)胞作為對(duì)照組，不加細(xì)胞僅加培養(yǎng)基為空白對(duì)照組，最終選取一個(gè)最適時(shí)間點(diǎn)和三個(gè)最適藥物濃度水平用于后續(xù)試驗(yàn)。3、RT-qPCR檢測(cè)在不同濃度苦參堿干預(yù)

3、宮頸癌Hela、Siha細(xì)胞48h后，細(xì)胞中SHP2、SOCS3及PIAS1的mRNA的表達(dá)情況。4、Western blottling印跡法檢測(cè)在不同苦參堿濃度干預(yù)48h后，宮頸癌Hela、Siha細(xì)胞中SHP2、SOCS3及PIAS1蛋白的表達(dá)水平情況。
　　研究結(jié)果：
　　1、不同濃度苦參堿均能抑制宮頸癌Hela、Siha細(xì)胞的增殖，呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性。濃度相同時(shí)，隨著苦參堿作用時(shí)間的增加，Hela、Siha細(xì)胞

4、的增殖抑制率明顯升高（P<0.05）；同一作用時(shí)間，隨著苦參堿濃度的增加，Hela、Siha細(xì)胞的增殖抑制率也明顯升高（P<0.05），其中以苦參堿濃度4.0mg/ml、作用時(shí)間72h的細(xì)胞增殖抑制率最高，宮頸癌Hela、Siha細(xì)胞的增殖抑制率分別為（75.07?2.32）％、（70.88?3.27）%，各濃度和時(shí)間之間比較具有顯著性差異（P<0.01）。選擇三個(gè)最適藥物濃度(0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml

5、)以及一個(gè)最適作用時(shí)間48h，作為后續(xù)Western blottling和RT-qPCR的實(shí)驗(yàn)條件。
　　2、RT-qPCR結(jié)果顯示：與正常對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組不同濃度苦參堿（0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml）作用宮頸癌Hela、Siha細(xì)胞48h后胞內(nèi)的SHP2、SOCS3mRNA表達(dá)量均上調(diào)，且SHP2、SOCS3的mRNA上調(diào)量隨苦參堿藥物濃度升高而增多，具有濃度依賴性，各組mRNA表達(dá)量與對(duì)照組相比

6、差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)各組間相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、Western blotting結(jié)果顯示：與正常對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組不同濃度苦參堿（0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml）作用宮頸癌Hela、Siha細(xì)胞48h后細(xì)胞內(nèi)的SHP2、SOCS3蛋白表達(dá)水平增加，且SHP2、SOCS3的蛋白表達(dá)量隨苦參堿藥物濃度升高而增多，具有濃度依賴性。實(shí)驗(yàn)各組蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比差異

7、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)各組間蛋白表達(dá)量相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4、與正常對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組不同濃度苦參堿干預(yù)宮頸癌Hela、Siha細(xì)胞48h后，兩種細(xì)胞內(nèi)的PIAS1的蛋白及mRNA表達(dá)量均無(wú)明顯改變，各組蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；實(shí)驗(yàn)各組間相比差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、苦參堿對(duì)宮頸癌細(xì)胞Hela、Siha的增殖有明顯的抑