HER-2在骨肉瘤中的表達(dá)及篩選其適配子方法的研究.pdf

1、目的：研究人表皮生長因子受體2（Her-2）在骨肉瘤中的表達(dá)情況，探討其表達(dá)的臨床意義，并且利用 SELEX（system evolution of Iigands by exponential enrichment）技術(shù)篩選與HER2蛋白特異性結(jié)合的適配子（aptamer）。
　　方法：1.采用免疫組化SP法檢測80例骨肉瘤組織中HER-2的表達(dá)，比較不同的臨床參數(shù)與HER-2表達(dá)的相關(guān)性。2.在證實(shí)了HER-2與骨肉瘤發(fā)生發(fā)展

2、有著關(guān)聯(lián)的條件下，體外合成78個(gè)長度的堿基，并且含有35個(gè)隨機(jī)寡核苷酸的ssDNA文庫，次級(jí) ssDNA文庫的制備是通過生物素-鏈親和素磁珠系統(tǒng)分離法得到的，且HER2蛋白的適配子是以微孔為介質(zhì)的SELEX正反篩法獲得。同時(shí)，每輪ssDNA與靶蛋白HER2的親和力是通過生物素-鏈霉親和素-辣根過氧化物酶系統(tǒng)檢測，最后，將親和力最高的適配子群進(jìn)行克隆、測序。最后，適配體群的一級(jí)結(jié)構(gòu)和二級(jí)結(jié)構(gòu)要采用生物學(xué)軟件DNAMAN進(jìn)行分析，將親和性最

3、高的適配子做了進(jìn)一步的特異性的檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：1.共80例病理標(biāo)本中，有61例骨肉瘤組織中HER-2呈陽性表達(dá)，其陽性表達(dá)率為76.3％（61/80）；其中不同性別、年齡階段，腫瘤發(fā)生部位、腫瘤直徑大小病理組織中 HER-2的表達(dá)未見差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而在患者 TNM分期高和發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中 HER-2表達(dá)顯著，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2.經(jīng)過12輪的篩選，得到了適配體9號(hào)與HER2蛋白具有