WNT6在骨肉瘤組織中的表達及臨床意義及其對骨肉瘤細胞增殖侵襲的影響.pdf

1、骨肉瘤是最常見的惡性骨腫瘤之一,好發(fā)于青少年,具有早期轉(zhuǎn)移和侵襲能力強的特點,致殘致死率相當高;其昂貴的治療費用、痛苦的化療給患者及家人帶來很大影響。對骨肉瘤的早期診斷和治療到目前為止還缺乏有效的措施,骨肉瘤的發(fā)病原因和發(fā)病機制仍是未知的難題。因此,研究骨肉瘤的發(fā)病原因和機制,探尋診斷和治療骨肉瘤的有效途徑,已成為現(xiàn)階段骨肉瘤研究領(lǐng)域的主要方向之一。
　　骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展是一個多因素、多基因作用的復(fù)雜調(diào)節(jié)過程。近年來,有關(guān)細胞信號

2、轉(zhuǎn)導(dǎo)與骨肉瘤發(fā)生的關(guān)系成為腫瘤研究的熱點,WNT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的異常改變在許多腫瘤中顯示出重要意義。WNT信號通路是一個復(fù)雜的蛋白質(zhì)作用網(wǎng)絡(luò),參與成年動物的正常生理過程,同時也參與調(diào)節(jié)動物的胚胎發(fā)育、組織穩(wěn)態(tài)及癌變等多個方面。WNT6基因是WNT家族中的重要成員,本課題組前期實驗發(fā)現(xiàn)WNT6在高轉(zhuǎn)移潛能骨肉瘤細胞系F5M2中和低轉(zhuǎn)移潛能骨肉瘤細胞系F4中差異表達明顯,這提示W(wǎng)NT6可能參與調(diào)控骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等生物學行為。

3、　　目的:
　　本研究通過觀察WNT6在骨肉瘤組織中的表達,探討其臨床意義;通過siRNA抑制WNT6基因的表達,探討其對骨肉瘤細胞增殖及侵襲能力的影響。為以WNT6為指標對原發(fā)性骨肉瘤的診斷和以WNT6為靶點進行原發(fā)性骨肉瘤生物學治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、收集骨肉瘤、骨樣骨瘤和骨軟骨瘤臨床樣本,應(yīng)用SP免疫組織化學染色法分別檢測各組織中WNT6蛋白的表達情況,并分析其與骨肉瘤臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。2

4、、以RNAi技術(shù)抑制MG63細胞和F5M2細胞中WNT6基因的表達,應(yīng)用FAM-siRNA和Western-blot檢測轉(zhuǎn)染效率和轉(zhuǎn)染W(wǎng)NT6-siRNA后骨肉瘤細胞中WNT6蛋白的表達情況。3、應(yīng)用MTT法和Transwell法檢測抑制WNT6表達對骨肉瘤細胞增殖和侵襲能力影響。
　　結(jié)果:
　　1、WNT6在原發(fā)性骨肉瘤組織中陽性表達,明顯高于骨樣骨瘤和骨軟骨瘤組織;WNT6的表達與年齡、腫瘤最大徑、肺轉(zhuǎn)移等密切相關(guān),與

5、3年生存率負相關(guān);復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組WNT6陽性表達明顯高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組。2、成功轉(zhuǎn)染W(wǎng)NT6-siRNA后,兩株骨肉瘤細胞的WNT6蛋白表達水平均明顯降低。3、MTT實驗結(jié)果顯示:抑制WNT6基因表達后兩株骨肉瘤細胞的增殖均明顯減弱;Transwell實驗結(jié)果顯示,抑制WNT6基因表達后兩株骨肉瘤細胞的侵襲能力均明顯減弱。
　　結(jié)論:
　　WNT6在原發(fā)性骨肉瘤中的表達明顯上調(diào),WNT6表達與骨肉瘤的肺轉(zhuǎn)移、生存率等相關(guān),siRN