淫羊藿苷對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心肌細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察淫羊藿苷（ICA）對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）左心室重構(gòu)及心肌細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用，并探討其對(duì)線粒體調(diào)控的凋亡通路及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）調(diào)控的凋亡通路中相關(guān)因子的影響。
　　方法：28只14周齡雄性SHR隨機(jī)均分為模型組（SHR組），ICA低劑量組（10 mg/kg，ICA-L）、ICA中劑量組（20 mg/kg，ICA-M）、ICA高劑量組（40 mg/kg， ICA-H），經(jīng)灌胃給予ICA混懸液每日一次至26周齡，7只

2、14周齡的雄性魏-凱二氏大鼠（WKY）作為空白對(duì)照組（WKY組），WKY組和SHR組均給與灌胃等體積雙蒸水，每周記錄各組大鼠體重變化、Kent Scientific CODA系統(tǒng)檢測(cè)大鼠血壓變化，采用VEVO2100小動(dòng)物超聲檢測(cè)大鼠左心功能，12周后采用2％的戊巴比妥鈉腹腔注射0.2 mL/100g麻醉動(dòng)物后處死動(dòng)物取出心臟分離左心室計(jì)算左心質(zhì)量指數(shù)；H&E染色觀察心臟形態(tài)變化，Masson三色染色法觀察左心室膠原沉積情況；TUNEL

3、染色觀察左心室心肌細(xì)胞凋亡情況，透射電子顯微鏡觀察左心室心肌細(xì)胞內(nèi)線粒體等超微結(jié)構(gòu)改變，RT-qPCR法檢測(cè)大鼠左心室組織中p53、Bcl-2、Bok、Bax、ATF-6、CHOP、IRE-1α、BAP31、ASK-1、ATF-4的mRNA水平；蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）檢測(cè)左心室組織中p53、Bcl-2、Bok、Bax、cleaved caspase3、GRP78、p-PERK、ATF-6、ATF-4、CHOP、casp

4、ase12、c-Jun、ASK-1、JNK、DR5的含量。
　　結(jié)果：與WKY相比，SHR組血壓明顯上升，左心室短軸縮短率（FS）下降、射血分?jǐn)?shù)（EF）減少、每搏輸出量（SV）減少、左室舒張末壓（LVEDP）增高（P＜0.05），左心質(zhì)量指數(shù)增加（P＜0.05）。H&E染色可見(jiàn)SHR組心肌細(xì)胞肥大，間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肌絲部分?jǐn)嗔亚遗帕形蓙y，Masson染色提示心肌間質(zhì)膠原沉積增加，經(jīng)統(tǒng)計(jì)膠原面積/總面積增加（P＜0.05）；電鏡下

5、SHR組可見(jiàn)心肌細(xì)胞內(nèi)部分線粒體腫脹、聚集，線粒體嵴融合、并呈現(xiàn)堆積狀；TUNEL染色后發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞凋亡增多，經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞凋亡百分比明顯上升（P＜0.05）。左心室組織中p53、Bok、Bax、CHOP、BAP31、ASK-1、ATF-4、ASK-1的mRNA水平和蛋白質(zhì)水平均上升（P＜0.05），Bcl-2的mRNA和蛋白水平降低（P＜0.05），而ATF-6、IRE-1α的mRNA水平無(wú)明顯變化，cleaved caspase

6、3、GRP78、p-PERK、ATF-6、caspase12、c-Jun、JNK、DR5的蛋白水平均明顯上調(diào)（P＜0.05）；給予ICA10、20、40 mg/kg干預(yù)后，均可減輕SHR血壓，降低SHR左心室FS、LVEDP及左心室質(zhì)量指數(shù)（P＜0.05）；提高左心室EF、SV（P＜0.05），通過(guò)H&E染色、Masson染色和透射電鏡觀察可以發(fā)現(xiàn)與SHR組相比給予ICA各劑量治療后心肌細(xì)胞肥大減輕、心肌細(xì)胞排列趨于整齊，心肌間質(zhì)中膠原

7、沉積有所減少，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況減輕，心肌細(xì)胞內(nèi)的線粒體形態(tài)也趨于正常未見(jiàn)明顯的線粒體腫脹、線粒體脊形態(tài)尚在；左心室組織中p53、Bok、Bax、CHOP、BAP31、ATF-4的mRNA水平和蛋白質(zhì)水平均下調(diào)（P＜0.05），Bcl-2的mRNA和蛋白水平增加（P＜0.05），同時(shí)ATF-6、IRE-1α的mRNA水平也無(wú)明顯變化，cleaved caspase3、GRP78、p-PERK、ATF-6、caspase12、c-Jun、J