解脲脲原體感染對大鼠生殖細(xì)胞的影響及干預(yù)治療的研究.pdf

1、目的：探討解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum，UU)對生殖細(xì)胞的影響及抗生素治療對解脲脲原體感染的作用。為探討UU導(dǎo)致男性不育的機(jī)制提供依據(jù)及為臨床治療男性不育提供新思路。
　　方法：
　　(1)選用清潔級成年SD大鼠，隨機(jī)分為對照組、7天組、14天組和治療組，對照組24只大鼠，其余各組12只。7天組、14天組和治療組每只大鼠經(jīng)膀胱注射0.6ml的107CCU/ml UU菌液，對照組給予等體積的UU液體

2、培養(yǎng)基。治療組于注射后第七天給予美滿霉素灌胃治療。對照組和7天組于注射后7天，對照組、14天組和治療組于注射后14天，分別用20％烏拉坦麻醉大鼠后打開腹腔，獲取血液及睪丸組織進(jìn)行研究。
　　(2)用電子天平稱取大鼠左右側(cè)睪丸的重量。
　　(3)提取各組睪丸組織DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增UU特異性的脲酶基因片段，瓊脂糖電泳檢測。
　　(4)各組睪丸組織用Bouin’s固定液固定16~18小時，HE染色觀察睪丸組織病理變化；TU

3、NEL法檢測細(xì)胞凋亡；免疫組化法檢測凋亡蛋白Bak、Bax、FasL。
　　(5)用化學(xué)發(fā)光法檢測各組大鼠血漿及睪丸間質(zhì)液中睪酮水平。
　　(6)各組睪丸組織用2%戊二醛固定2小時以上，透射電鏡觀察睪丸生精細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：
　　(1) UU感染后，在7天組、14天組和治療組大鼠的睪丸組織中檢測到UU特異性脲酶基因片段，而對照組未見。
　　(2) UU感染7天組大鼠的睪丸重量稍低于其它各組，然而各

4、組間睪丸的重量并無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(3) HE染色顯示7天組和14天組大鼠的睪丸組織呈炎癥性病理變化，曲細(xì)精管生精細(xì)胞層次和數(shù)量減少，基底膜破壞，炎細(xì)胞浸潤，成熟精子減少，但14天組睪丸組織炎癥性病變較7天組輕，而治療組睪丸組織結(jié)構(gòu)接近正常。
　　(4) UU感染后，7天組大鼠睪丸間質(zhì)液中睪酮水平明顯低于其它各組(P<0.01)，14天組、治療組和對照組之間睪酮水平無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(5) UU感染后，7天組和14

5、天組大鼠血漿中睪酮水平明顯低于對照組和治療組(P<0.01)，14天組血漿中睪酮水平高于7天組(P<0.05)。
　　(6) TUNEL法檢測發(fā)現(xiàn)，7天組、14天組和治療組大鼠生精細(xì)胞凋亡率較對照組明顯升高(P<0.01)；與治療組相比，7天組和14天組生精細(xì)胞凋亡率均明顯升高(P<0.01)，且7天組生精細(xì)胞凋亡率明顯高于14天組(P<0.01)。
　　(7)透射電鏡檢測發(fā)現(xiàn)，UU感染7天組和14天組生精細(xì)胞的細(xì)胞核染色質(zhì)

6、出現(xiàn)濃縮、聚集化等凋亡表現(xiàn)，7天組生精細(xì)胞核膜皺縮，細(xì)胞核破裂，14天組細(xì)胞核染色質(zhì)濃縮、聚集化有減輕的趨勢。治療組生精細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)較為完整。
　　(8)免疫組化檢測大鼠睪丸組織的凋亡蛋白Bak、Bax、FasL發(fā)現(xiàn)：7天組、14天組和治療組Bak蛋白均較對照組明顯升高(P<0.01)，且7天組和14天組Bak蛋白表達(dá)均高于治療組(P<0.01或P<0.05)；與對照組和治療組相比，7天組和14天組Bax蛋白表達(dá)均明顯升高(P<0

7、.01)，且7天組明顯高于14天組(P<0.05)；與對照組相比，7天組、14天組和治療組FasL蛋白表達(dá)均升高(P<0.01或P<0.05)，但7天組和14天組的FasL蛋白表達(dá)高于治療組(P<0.01或P<0.05)，且7天組明顯高于14天組(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　(1) UU感染可導(dǎo)致大鼠睪丸組織出現(xiàn)病理性改變。
　　(2) UU感染可導(dǎo)致大鼠睪丸組織生精細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率及凋亡蛋白表達(dá)升高，表明UU感