桉葉油對(duì)胎鼠腦組織Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：利用桉葉油灌胃SD孕鼠，通過(guò)檢測(cè)胎鼠腦組織中Wnt信號(hào)通路的信號(hào)分子Wnt3a、β-catenin蛋白及其mRNA的表達(dá)，研究桉葉油的生物學(xué)活性是否影響腦組織細(xì)胞Wnt3a、β-catenin蛋白及其mRNA的表達(dá)，為后期探索桉葉油拮抗維甲酸誘發(fā)神經(jīng)管畸形的作用機(jī)理是否與Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路有關(guān)提供部分實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)為桉葉油新的生物活性在臨床上開(kāi)發(fā)利用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：通過(guò)觀察陰栓的方法，選出SD孕鼠60只，隨機(jī)

2、分為6組，每組10只，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組（桉葉油高、中、低劑量），溶劑花生油組，陽(yáng)性對(duì)照組（維甲酸）和正常對(duì)照組（飲食自由）。3個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別用300mg/kg、200mg/kg、100mg/kg桉葉油于孕第7-16天灌胃，每天一次。溶劑組用花生油2ml/只于孕第7-16d灌胃，每天一次。陽(yáng)性對(duì)照組用40mg/kg的維甲酸于孕第10天灌胃一次。正常對(duì)照組為自由飲食。各組孕鼠除用藥不同外，其余飼養(yǎng)條件均相同。各組于孕16天末次用藥2小時(shí)后處死孕鼠取

3、胚胎，記錄孕鼠體重，子宮重，胎盤重。記錄胚胎植入總數(shù)，吸收胎數(shù)、活胎數(shù)、死胎數(shù)。觀察胚胎發(fā)育情況。每窩活胎中取兩只胎鼠腦組織左右各半分別置于1.5ml離心管中，-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。左大腦組織提取蛋白，Western Blot技術(shù)檢測(cè)其Wnt3a、β-catenin蛋白的表達(dá)，右大腦組織提取RNA，熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)其Wnt3a、β-cateninmRNA表達(dá)。其余胎鼠腦組織固定，免疫組化技術(shù)檢測(cè)其Wnt3a、β-cateni

4、n蛋白的表達(dá)，原位雜交技術(shù)檢測(cè)其Wnt3a、β-cateninmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.桉葉油對(duì)孕鼠的影響
　　各組孕鼠未見(jiàn)明顯的異常表現(xiàn)，被毛、活動(dòng)、飲食、大便均正常。各組孕鼠的體重變化、子宮重、活胎胎盤重均無(wú)顯著差異（P>0.05）。
　　2.桉葉油對(duì)大鼠胚胎植入的影響
　　正常胎鼠體型完好，皮膚紅潤(rùn)，刺激運(yùn)動(dòng)反應(yīng)良好，外觀無(wú)畸形?；翁ナ篌w型較正常胎鼠小，膚色偏暗紅色，可見(jiàn)無(wú)尾畸形特征。各

5、組孕鼠植入胚胎總數(shù)均無(wú)明顯差異（P>0.05）；桉葉油各組、溶劑花生油組的活胎率與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（P>0.05），但較陽(yáng)性對(duì)照組的活胎率高（P<0.05）。桉葉油各組、溶劑花生油組的吸收胎率與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（P>0.05），但較陽(yáng)性對(duì)照組的吸收胎率低（P<0.05）。桉葉油各組、溶劑花生油組和正常對(duì)照組胚胎中未見(jiàn)畸形胎和死胎，但在陽(yáng)性對(duì)照組中出現(xiàn)畸形胎和死胎，其畸胎率、死胎率與桉葉油各組、溶劑花生油組和正常對(duì)照組

6、比較有顯著差異（P<0.05）。提示在本實(shí)驗(yàn)條件下桉葉油對(duì)大鼠胚胎植入無(wú)明顯胚胎毒性，維甲酸干擾了大鼠胚胎植入，有胚胎毒性。
　　3.桉葉油對(duì)胎鼠腦組織Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表達(dá)的影響
　　與正常對(duì)照組比較，桉葉油各組、陽(yáng)性對(duì)照組胎鼠腦組織Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA的表達(dá)是增高的（P<0.05），而溶劑花生油組胎鼠腦組織Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA的表達(dá)是降低的（P<0