孕期-哺乳期砷暴露對仔鼠腦組織Sema3a表達(dá)影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:目前環(huán)境砷污染已經(jīng)成為一個日益突出的健康問題,慢性砷及其化合物暴露可導(dǎo)致砷在體內(nèi)蓄積,從而引起多系統(tǒng)損傷。大量流行病學(xué)及動物實(shí)驗(yàn)證明,慢性砷暴露對人類及動物具有神經(jīng)毒性作用,尤其在胎兒出生前后及發(fā)育階段對砷的神經(jīng)毒性更為敏感。因此,孕期/哺乳期低水平砷暴露所致神經(jīng)系統(tǒng)損傷及其機(jī)制研究,已成為當(dāng)今各國學(xué)者關(guān)注的一個熱點(diǎn)。
   學(xué)習(xí)和記憶是神經(jīng)系統(tǒng)所具有的重要功能之一。目前,已有許多學(xué)者證明了突觸可塑性與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)。突

2、觸可塑性分為功能可塑性和結(jié)構(gòu)可塑性,其中突觸結(jié)構(gòu)可塑性的建立必須通過軸突末端生長錐來實(shí)現(xiàn)。有研究表明發(fā)育期砷暴露可影響軸突的生長,而sema3a作為軸突導(dǎo)向因子對軸突的正常生長起重要調(diào)控作用。由此,孕期/哺乳期砷暴露是否影響Sema3a表達(dá)引起我們的關(guān)注。
   目的:觀察砷對仔鼠發(fā)育時期腦組織中軸突導(dǎo)向因子sema3a在基因和蛋白水平表達(dá)的影響,為闡明腦發(fā)育期砷暴露對學(xué)習(xí)記憶影響的毒作用機(jī)制提供靶基因依據(jù)。
   方法

3、:昆明孕小鼠按體重隨機(jī)分為飲用水對照組、1ppmAs2O3染毒組、4ppmAs2O3染毒組、16ppmAs2O3染毒組,每組6只,從孕0天起孕期和哺乳期對母鼠連續(xù)染毒,產(chǎn)后3周停止哺乳。于仔鼠出生后第21天分批脫頸處死,留取腦組織,置于-80℃冷凍固化。行為學(xué)試驗(yàn)測試孕期砷暴露至產(chǎn)后21天小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力?;蛐酒夹g(shù)篩選仔鼠腦發(fā)育相關(guān)基因,用PCR技術(shù)檢測小鼠腦組織軸突導(dǎo)向因子sema3a在mRNA水平的表達(dá),用Westernblo

4、t方法檢測sema3a蛋白表達(dá)。用免疫組化方法檢測生長相關(guān)蛋白(neuronalgrowthassociatedprotein,GAP43)在生長錐細(xì)胞膜的表達(dá)分布。采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件,用單因素方差分析(ANOVA),比較各染砷組與對照組間的統(tǒng)計學(xué)差異,兩組間比較用LSD法分析,以P<0.05表示統(tǒng)計學(xué)差異顯著。
   結(jié)果:跳臺實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著染毒劑量的增加,仔鼠從平臺跳下的潛伏期縮短,發(fā)生錯誤次數(shù)增加?;蛐酒Y

5、選出與腦發(fā)育相關(guān)的基因sema3a、RhoA、Rock1、Rock2、cRMPs的表達(dá)顯著上調(diào)。Real-timeRT-PCR、Westernblot檢測結(jié)果顯示,出生21天仔鼠腦組織Sema3a在基因和蛋白水平的表達(dá)在染砷組顯著升高,且呈劑量-反應(yīng)關(guān)系(p<0.05)。免疫組化結(jié)果顯示,與對照組相比,砷暴露組GAP43表達(dá)顯著降低,且呈現(xiàn)明顯的劑量反應(yīng)關(guān)系。
   結(jié)論:孕期/哺乳期砷暴露影響仔鼠學(xué)習(xí)記憶功能,上調(diào)仔鼠腦組織S

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