多酚與人血清白蛋白相互作用研究.pdf

1、人血清白蛋白(Human serum albumin, HSA)是體內(nèi)含量最豐富的運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)，它有許多重要的生理學(xué)和藥理學(xué)功能，能與體內(nèi)的許多內(nèi)源性小分子和外源性小分子等結(jié)合，并對(duì)這些分子起到存儲(chǔ)和轉(zhuǎn)運(yùn)的作用，進(jìn)而將這些分子運(yùn)輸?shù)绞荏w部位，并發(fā)揮藥效。這一特點(diǎn)使HSA成為研究最廣泛的模式蛋白之一。多酚類小分子是廣泛存在于高等植物中且具有潛在生物活性的一類化合物，大多數(shù)的多酚是植物次級(jí)代謝產(chǎn)物。它能與人血清白蛋白相互作用后會(huì)形成一種超分子

2、復(fù)合物。在結(jié)合過(guò)程中會(huì)涉及多酚與人血清白蛋白的結(jié)合率高低問(wèn)題，以及與蛋白的結(jié)合力強(qiáng)弱問(wèn)題，這些都會(huì)影響多酚在體內(nèi)生物活性的發(fā)揮。研究清楚二者之間的結(jié)合規(guī)律不僅可以為營(yíng)養(yǎng)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)提供重要的參考數(shù)據(jù)，還對(duì)了解多酚在體內(nèi)的代謝過(guò)程，闡明多酚與載體蛋白的作用機(jī)制，研究多酚的代謝動(dòng)力學(xué)以及其毒理性質(zhì)也有重要幫助。同時(shí)，對(duì)解釋蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系和開發(fā)新藥等都具有重要的生物學(xué)和生理學(xué)意義。
　　目前，小分子與生物大分子相互作用的研究越來(lái)

3、越受到學(xué)者的關(guān)注，研究方法也越來(lái)越豐富，研究領(lǐng)域也逐漸拓展，但研究中存在的問(wèn)題是研究方法比較單一，關(guān)注的也是小分子與大分子相互作用的共性問(wèn)題。很少有文獻(xiàn)考慮到小分子與蛋白相互作用過(guò)程中的血漿蛋白結(jié)合（Plasma protein binding, PPB）率和引起蛋白結(jié)合率差異的因素等問(wèn)題；而且也很少有文獻(xiàn)提到二者相互結(jié)合作用過(guò)程中的結(jié)合力與蛋白結(jié)合率之間存在怎樣的關(guān)系。
　　因此，本論文基于開展小分子與載體蛋白相互作用的重要意義

4、及國(guó)內(nèi)外研究趨勢(shì)，在前人工作的基礎(chǔ)上，綜合利用高效親和色譜法（High performance affinity chromatography, HPAC）和熒光光譜法（Fluorescence spectra, FS）從以下幾個(gè)方面進(jìn)行了多酚與人血清白蛋白的相互作用研究：
　　1、利用高效親和色譜法研究了在接近生理?xiàng)l件下具有結(jié)構(gòu)差異的多酚與HSA的相互作用，利用色譜理論計(jì)算出各物質(zhì)與HSA的相對(duì)結(jié)合率，并分析了多酚結(jié)構(gòu)—結(jié)合率的

5、關(guān)系以及引起結(jié)合率高低差異的因素。
　　2、利用熒光光譜法研究了多酚與HSA結(jié)合的緊密情況，根據(jù)猝滅方程計(jì)算出各物質(zhì)與HSA的結(jié)合常數(shù)與結(jié)合位點(diǎn)。分析了引起人血清白蛋白熒光發(fā)射光譜發(fā)生紅移以及藍(lán)移的原因。以及引起多酚與HSA相互作用的主要作用力，多酚結(jié)構(gòu)—結(jié)合力之間的關(guān)系等問(wèn)題。
　　3、綜合高效親和色譜法與熒光光譜法的結(jié)果，探討分析了多酚與HSA的結(jié)合率以及結(jié)合力之間的關(guān)系。
　　本論文共分為四部分：
　　第一

6、章：主要綜述了小分子多酚的結(jié)構(gòu)，分類及應(yīng)用；介紹了人血清白蛋白的性質(zhì)，結(jié)構(gòu)，功能；研究小分子與大分子相互作用的常用方法以及小分子與生物大分子相互作用的研究現(xiàn)狀。
　　第二章：多酚類化合物與HSA的結(jié)合率關(guān)系研究。高效親和色譜法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各多酚的色譜保留值可以作為定性分析的依據(jù)；多酚與HSA有明顯的結(jié)合作用，且各多酚與HSA的結(jié)合率有差異；多酚母環(huán)上的不同基團(tuán)對(duì)其與HSA的結(jié)合率有明顯的影響作用；其中，甲基化作用降低多酚與HSA

7、的蛋白結(jié)合率，一般A環(huán)羥基化增加多酚與HSA的蛋白結(jié)合率，而B環(huán)羥基化則減弱這種作用， C2=C3碳碳雙鍵的氫化作用以及糖基化作用使多酚的蛋白結(jié)合率降低。
　　第三章：多酚類化合物與HSA的結(jié)合力關(guān)系研究。熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，多酚對(duì)HSA的熒光光譜有明顯的猝滅作用，且HSA最大熒光發(fā)射伴隨有一定的紅移或藍(lán)移現(xiàn)象；不同結(jié)構(gòu)的多酚對(duì)人血清白蛋白內(nèi)在熒光猝滅的程度也不同，熒光猝滅效果隨著多酚濃度的增加而增強(qiáng)。其中，甲基化作用增強(qiáng)多酚與HS