絞股藍總皂苷對小鼠實驗性視神經炎視神經及視網膜保護作用的研究.pdf

1、目的：誘導C57BL/6小鼠建立實驗性自身免疫性腦脊髓炎（ExperimentalAutoimmune Encephalomyelitis，EAE）動物模型，應用絞股藍總皂苷(Gypenosides，GPs)進行干預，觀察小鼠神經功能行為改變、視神經及視網膜形態(tài)學改變、視網膜神經節(jié)細胞(Retinal Ganglion Cells，RGCs)凋亡情況，探討GPs對EAE小鼠視神經及視網膜的保護作用。
　　方法：應用MOG35-55

2、多肽加完全弗氏佐劑皮下注射免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型，實驗分為正常對照組、EAE模型組、GPs干預組、甲基強的松龍組（MP組）、GPs與甲基強的松龍聯(lián)合干預組（COM組）。自免疫后第7天起，GPs干預組每天給予腹腔內注射GPs30mg/kg，連續(xù)給藥至動物處死;MP組每天給予腹腔內注射甲基強的松龍20mg/kg，連續(xù)給藥3天;COM組每天給予腹腔內注射甲基強的松龍20mg/kg，連續(xù)給藥3天，給予腹腔內注射GPs30mg/kg

3、，連續(xù)給藥至動物處死。每天稱量小鼠體重，觀察記錄神經功能表現(xiàn)、評分，于免疫后第7天進行視覺誘發(fā)電位檢查;于免疫后第14天、第20天、第30天、第40天進行OCT檢查，于免疫后第20天、第40天取小鼠視神經及視網膜組織制成石蠟切片，采用HE染色評估視神經、視網膜炎性細胞浸潤情況，TUNEL法檢測RGCs凋亡改變。
　　結果：1、發(fā)病時間、評分:正常對照組小鼠未出現(xiàn)癥狀;實驗組小鼠于免疫后一周左右體重稍有下降，后逐漸增長;實驗組小鼠于

4、免疫后第9天起陸續(xù)發(fā)病。EAE組小鼠發(fā)病率為100％，神經功能評分較高，病情最嚴重;GPs組發(fā)病率為97％，COM組、MP組發(fā)病率均為90％。COM組可推遲發(fā)病時間，與EAE組相比，差別具有統(tǒng)計學意義。正常對照組小鼠評分均為0分，免疫后第14天，COM組與EAE組相比，癥狀較輕，評分較低，差別具有統(tǒng)計學意義;在其余各時間段三組藥物干預組小鼠癥狀評分與EAE組相比，總體評分較低，但差別無統(tǒng)計學意義。
　　2、VEP:正常對照組、EA

5、E組小鼠免疫后第7天VEP檢查結果顯示EAE組小鼠的N1波潛伏期、P1波潛伏期、P2波潛伏期均較正常對照組延長，P1波振幅較正常對照組下降，差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而N2波潛伏期、P2波振幅與正常對照組相比無明顯差異。
　　3、OCT:免疫后第20天，EAE組RNFL與正常對照組、三個藥物干預組相比明顯變薄，差別具有統(tǒng)計學意義;三個藥物干預組之間對比差異不大，且均與正常對照組相似厚度，無統(tǒng)計學差異。免疫后第30天，EA

6、E組RNFL進一步變薄，EAE組、MP組RNFL與正常對照組相比均明顯變薄P＜0.01，EAE組為甚，正常對照組、GPs組、COM組相似厚度，無統(tǒng)計學差異;三個藥物干預組均較EAE組厚，具有統(tǒng)計學差異;MP組較GPs組、COM組薄，差別具有統(tǒng)計學意義。免疫后第40天，EAE組、MP組RNFL進一步變薄，GPs組、COM組相似厚度且均與正常對照組相似厚度，無統(tǒng)計學差異;GPs組、COM組均較EAE組、MP組為厚，具有統(tǒng)計學差異。
　

7、　4、HE染色:正常對照組小鼠視網膜結構排列整齊，染色均勻，未發(fā)現(xiàn)有炎性細胞浸潤;視神經縱切面HE染色均勻，神經纖維整齊均勻排列，未觀察到有炎性細胞浸潤現(xiàn)象。于小鼠免疫后第20天，EAE組視網膜、視神經可見較多數量的炎性細胞浸潤，水腫較明顯，神經纖維排列紊亂，大量空泡形成;三個藥物干預組炎性浸潤程度相似且均較EAE組少見，水腫較輕。于小鼠免疫后第40天，各組小鼠視神經、視網膜的炎性細胞浸潤均較前減少，水腫較前減輕，三個藥物干預組與EAE

8、組相比，神經節(jié)細胞層水腫較輕，炎性細胞也較少見?？梢奅AE組、MP組RGCs較前明顯減少，排列疏松。
　　5、TUNEL染色:正常對照組小鼠幾乎未觀察到RGCs凋亡;實驗組均可見不同程度的RGCs凋亡，其中以EAE組、MP組最為明顯，且隨著時間的推移，凋亡細胞數目逐漸增多，與正常對照組相比具有顯著差異。GPs組、COM組凋亡細胞相對較少，隨著藥物干預時間的延長，存活的RGCs較EAE組多。
　　結論：(1)絞股藍總皂苷與甲基