尼莫地平對實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠視神經(jīng)炎干預(yù)的實驗研究.pdf

1、目的：視神經(jīng)炎(Optic Neuritis，ON)是累及視神經(jīng)的急、亞急性炎性或脫髓鞘過程。本實驗通過實驗性自身免疫性腦脊髓炎(Experimental Allergic Encephalomyelitis，EAE)動物模型的建立，觀察不同時間點視神經(jīng)的形態(tài)學(xué)改變，為脫髓鞘性視神經(jīng)炎的研究建立實驗平臺。同時運用Ca<'2+>拮抗劑尼莫地平對EAE大鼠視神經(jīng)炎進(jìn)行干預(yù)，通過免疫組化檢測神經(jīng)微絲蛋白(NF-200)、Fas在大鼠視神經(jīng)中的

2、表達(dá)，探討Ca<'2+>拮抗劑尼莫地平對脫髓鞘性視神經(jīng)炎中的作用，為脫髓鞘性視神經(jīng)炎的治療提供新的方法和實驗依據(jù)。 方法：(1)以豚鼠腦脊髓勻漿加完全弗式佐劑(Complete FreundAdjuvant，CFA)作為抗原，給予12只雌性Wistar大鼠足墊皮下注射，另外在足背皮內(nèi)注射百日咳桿菌，建立大鼠EAE模型(第8、12、18、30天4個檢測時間點各3只)。4只大鼠做正常對照。觀察動物的臨床表現(xiàn)，按照Koh評分標(biāo)準(zhǔn)評分。

3、分別于免疫后第8、12、18、30天處死動物，取視神經(jīng)標(biāo)本，分別做HE染色、髓鞘特殊染色和電鏡觀察。(2)將36只雌性Wistar大鼠隨機分成三組：正常對照組4只；EAE模型組和尼莫地平干預(yù)組各16只(第8、12、18、30天4個檢測時間點各4只)。從免疫后第1天起，給予動物藥物干預(yù)。尼莫地平的計量為1mg.kg<'-1>.d<'-1>灌胃治療，正常對照組和EAE模型組用等量的生理鹽水替代。觀察動物的臨床表現(xiàn)，按照Koh評分標(biāo)準(zhǔn)評分。分

4、別于免疫后第8、12、18、30天處死動物，取視神經(jīng)標(biāo)本，用免疫組化方法檢測大鼠視神經(jīng)中NF200、Fas的表達(dá)。 結(jié)果：(1)所建立EAE動物模型的臨床表現(xiàn)、病理變化等方面均符合EAE的臨床和病理特征。EAE模型組各個時間段視神經(jīng)均發(fā)生了不同程度的形態(tài)學(xué)改變：光鏡下表現(xiàn)為不同程度的神經(jīng)纖維空泡樣變性，軸束不規(guī)則腫脹，淋巴細(xì)胞浸潤，大量膠質(zhì)細(xì)胞和膠原組織形成增生組織成網(wǎng)狀。電鏡下主要表現(xiàn)為軸突內(nèi)空泡樣變性、髓鞘松解、脫落、微絲微

5、管消失等。(2)EAE模型組與尼莫地平干預(yù)組和正常對照組相比較，NF200染色陽性軸索數(shù)量明顯減少，F(xiàn)as的表達(dá)顯著增加，EAE模型組、尼莫地平干預(yù)組及正常組各指標(biāo)相比較均有顯著性差異。 結(jié)論：(1)本實驗建立的EAE動物模型成功、穩(wěn)定、可靠。EAE大鼠視神經(jīng)有淋巴細(xì)胞浸潤，髓鞘松解，其視神經(jīng)與正常大鼠相比較，確實發(fā)生了較為嚴(yán)重的病理學(xué)改變。該動物模型可用于脫髓鞘性視神經(jīng)炎的研究。(2)Ca<'2+>拮抗劑尼莫地平可上調(diào)NF20