米諾環(huán)素對實(shí)驗(yàn)性視神經(jīng)炎大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：視神經(jīng)炎(Optic Neuritis，ON)是累及視神經(jīng)的急、亞急性炎性或脫髓鞘過程，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(Retinal Ganglion Cells，RGCs)凋亡和軸突損傷是導(dǎo)致視力永久性喪失的最終原因。為探討米諾環(huán)素對脫髓鞘性視神經(jīng)炎R(shí)GCs的保護(hù)作用，本實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)Wistar大鼠建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(expefimental autoimmuneencephalomyelitis，EAE)動(dòng)物模型，在此模型中通過視神

2、經(jīng)形態(tài)學(xué)改變證實(shí)大鼠脫髓鞘性視神經(jīng)炎模型的建立，同時(shí)運(yùn)用米諾環(huán)素對大鼠脫髓鞘性視神經(jīng)炎進(jìn)行干預(yù)，通過觀察大鼠RGCs凋亡及視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中Caspase-3蛋白表達(dá)，探討米諾環(huán)素在脫髓鞘性視神經(jīng)炎中的作用，并與甲基強(qiáng)的松龍比較。 方法：22只雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對照組(n=5)和實(shí)驗(yàn)組(n=17)，實(shí)驗(yàn)組以豚鼠脊髓勻漿加完全弗式佐劑(Complete FreundAdjuvant，CFA.)作為抗原，給予17只雌性

3、Wistar大鼠足墊皮下注射，同時(shí)在足背皮內(nèi)注射百日咳桿菌，建立大鼠EAE模型。17只EAE大鼠又隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)對照組(EAE組)、米諾環(huán)素組和甲基強(qiáng)的松龍組(MP組)，實(shí)驗(yàn)對照組(EAE組)7只，其余每組各5只，米諾環(huán)素組自免疫后第8天起每天給予米諾環(huán)素45mg.kg-1灌胃，MP組自免疫后第8天起每天腹腔注射甲基強(qiáng)的松龍20mg.kg-1。各組大鼠分別于免疫后第18天處死，觀察大鼠視神經(jīng)及視網(wǎng)膜病理變化，TUNEL法檢測RGCs凋亡、

4、免疫組化法檢測視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中Caspase-3蛋白表達(dá)。 結(jié)果： 1.EAE組視神經(jīng)光鏡下表現(xiàn)為神經(jīng)纖維空泡樣變性，軸突不規(guī)則腫脹，大量炎性細(xì)胞浸潤，電鏡下表現(xiàn)為軸突內(nèi)空泡樣變性，髓鞘松解脫落，微絲微管消失，EAE大鼠視神經(jīng)病理變化符合脫髓鞘性視神經(jīng)炎改變。 2.正常大鼠視神經(jīng)軸突占橫切面積比例約為91.65％，EAE組約為26.18％，米諾環(huán)素組約為51.09％，MP組約為54.12％，EAE組、米諾環(huán)素組

5、與正常組相比，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，米諾環(huán)素組、MP組與EAE組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 3. 正常大鼠幾乎未見RGCs凋亡，EAE組、米諾環(huán)素組、MP組較正常組相比，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，EAE組、MP組較米諾環(huán)素組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，MP組與EAE組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 4.正常大鼠視網(wǎng)膜幾乎未見Caspase-3蛋白表達(dá)，E

6、AE組、MP組與米諾環(huán)素組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，MP組與EAE組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論： (1)米諾環(huán)素可減輕脫髓鞘性視神經(jīng)炎軸突損傷，抑制脫髓鞘性視神經(jīng)炎大鼠RGCs凋亡。 (2)甲基強(qiáng)的松龍可以減輕脫髓鞘性視神經(jīng)炎軸突損傷，但不能阻止脫髓鞘性視神經(jīng)炎大鼠RGCs凋亡。 (3)米諾環(huán)素可下調(diào)Caspase-3在視網(wǎng)膜中表達(dá)，提示米諾環(huán)素對脫髓鞘性視神經(jīng)炎R(shí)GCs的