靈芝菌絲體和子實體中三萜酸的高效提取及其組分初步分析.pdf

1、靈芝三萜酸是除多糖外靈芝中最主要的活性成分，具有廣泛的藥理作用。然而，目前市場上三萜酸產品稀少，價格昂貴，嚴重阻礙了對其藥理和應用開發(fā)的進一步研究。因此，對不同來源的靈芝材料進行三萜酸的提取并對其組分進行分析具有重要的現(xiàn)實意義。本論文以靈芝子實體和菌絲體為研究對象，分別對其三萜酸的提取技術進行了試驗，在此基礎上，對三萜酸的組分進行了初步分析，并對相應產品的穩(wěn)定性進行了研究，得出以下主要結果:
　　1.以靈芝子實體為研究對象，通過對

2、比實驗確定以無水乙醇為提取溶劑，不經(jīng)酶預處理的回流提取法作為研究靈芝子實體中三萜酸高效提取的基礎。進一步進行單因素實驗、Box-Benhnken設計以及響應面法優(yōu)化。以液料比(A)、提取時間(B)和提取次數(shù)(C)為提取的關鍵因素，通過Box-Benhnken設計及響應面法優(yōu)化，得到了可預測靈芝子實體三萜酸提取率的回歸模型: Y=0.33+0.003125A+0.021B-0.014C+0.0005AB-0.019AC-0.005BC-0

3、.044A2-0.040B2-0.032C2。經(jīng)分析，得到提取靈芝子實體中三萜酸的最佳條件為:液料比25∶1，提取時間2h，提取次數(shù)3次。最優(yōu)條件下的子實體三萜酸提取率為(0.335±0.008)mg/g，與模型預測值相符。
　　2.以靈芝CGMCC5.616菌株為研究對象，通過搖瓶發(fā)酵獲得大量菌絲體。確定以無水乙醇進行回流提取的前提下，采用單因素實驗考察液料比、提取時間和提取次數(shù)等對靈芝菌絲體三萜酸提取率的影響，然后通過中心組合

4、旋轉設計和響應面優(yōu)化實驗，得到了靈芝菌絲體三萜酸提取率對這三個因素的多元回歸方程:Y=0.52+0.022A+0.027B+0.064C+0.021AB-0.013AC+0.010BC-0.056A2-0.094B2-0.057C2。確定了最佳提取條件為:液料比12∶1，提取時間2h，提取次數(shù)3次。驗證試驗結果表明菌絲體三萜酸提取率為(0.537±0.005))mg/g，與模型預測值相符。
　　3.以ADS-8大孔樹脂為媒介，對提

5、取的靈芝三萜酸進行了初分離。考察了洗脫流速對靈芝菌絲體三萜酸的影響，液相色譜分析顯示，不同流速下洗脫出的三萜酸組成不同，特別是保留時間為44.66min的色譜峰在含量上差異較大;當流速為3mL/min時，與1mL/min，2mL/min條件下相比，洗出了兩個新的組分峰(保留時間分別為66.27min和67.31min)。另外，乙醇濃度對菌絲體三萜酸的洗脫有顯著影響，70％～90％的乙醇可將三萜酸完全洗脫下來，60％的乙醇可洗脫下大部分的

6、三萜酸，而40％和20％的乙醇洗脫效果不理想。高效液相色譜進一步分析表明，菌絲體和子實體中三萜酸的組分存在著明顯差異，子實體中三萜酸成分出峰較晚，且組分相對較多。
　　4.采用LC-ESI-MS分析靈芝菌絲體中三萜酸成分，結果顯示，菌絲體中含有少量的靈芝酸A和靈芝酸B。另外，菌絲體中兩個主要的洗脫峰，一個為靈芝酸A的類似物，另一個為Ganolucidic acid B的類似物，但其具體結構還有待進一步確定。
　　5.三萜酸對